一种具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体的制备方法及其应用。本发明采用可修饰的四苯基乙烯衍生物分子与二溴异丁酰溴进行反应生成带有四个引发位点的星形引发剂；最后通过原子转移自由基活性聚合引发各种单体进行聚合；得到聚合物后再用乙醇胺和带有氨基的四苯基乙烯分子进行开环反应，得到阳离子基因载体。本发明合成的基因载体在HepG2、Hela、C6、COS7、SL、H9C2细胞系中都有较好的转染效率，同时相对于PEI还具优良的细胞成像能力。本发明简单易行，其聚合方法保证了分子量的有效可控，而且相对于一般的阳离子基因载体，本发明制得的基因载体通过亲疏水作用形成胶束，从而增加细胞的转染效率。

主权项

一种具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体的制备方法，其特征在于，其具体操作步骤为：1)聚合反应：聚合反应体系在无氧环境下连续进行，聚合反应完成后加入水或者甲醇，或者暴露在空气中，使引发体系失活并且终止聚合，加入的水或者甲醇是四苯基乙烯星形引发剂的质量的200‑400倍，然后用乙醚、乙醇或者甲醇沉淀直到形貌变为固体，将其放入真空干燥箱中除去乙醚、乙醇或者甲醇得到粉末状或者絮状的固体；所述的聚合反应体系包括四苯基乙烯星形引发剂、有机溶剂、单体、配体、CuBr；其中单体与四苯基乙烯星形引发剂的质量比为0.001‑50，优选0.01‑40，更优选0.05‑30；配体与四苯基乙烯星形引发剂的质量比为0.01‑1.4，优选0.01‑1，更优选0.05‑1；CuBr与四苯基乙烯星形引发剂的质量比为0.001‑1.6，优选0.01‑1，更优选0.05‑0.08；有机溶剂与四苯基乙烯星形引发剂的质量比为50‑500，优选50‑450，更优选70‑400；2)开环反应：在30‑35℃无氧环境下向步骤1)得到的聚合产物中加入溶剂搅拌溶解，然后加入乙醇胺或/和乙二胺在80‑90℃温度下反应30‑50min；其中溶剂与聚合产物的质量比为200‑500，优选150‑450，更优选120‑350；乙醇胺或/和乙二胺与聚合产物的质量比为300‑600，优选450‑600，更优选450‑500；3)步骤2)开环反应后的产物加水透析，最后冷冻干燥即得到具有聚集诱导发光效应的阳离子基因载体，加水量与开环反应后的产物的比例为100‑350mL/g。