一种筛选抗生素结合蛋白的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种筛选抗生素结合蛋白的方法。本发明利用抗生素应激生物体，获得生物体的应激差异蛋白质组，再通过检测差异蛋白点中的抗生素含量，筛选并鉴定抗生素结合蛋白。本发明方法适用范围广，能够快速、准确地筛选出新的抗生素结合蛋白，对抗生素的检测和耐药菌的防治具有重要的意义。

主权项

一种筛选抗生素结合蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：    S1. 用抗生素应激生物体，提取生物体全部细胞蛋白进行电泳分离分析，得到应激蛋白质组，比对得到差异蛋白点；    S2. 回收差异蛋白点，分别进行抗生素检测，根据差异蛋白点中抗生素的含量，筛选并鉴定抗生素结合蛋白；    其中，S2所述抗生素检测采用间接竞争法，使差异蛋白点中的抗生素和偶联抗原竞争抗生素抗体，以生理盐水处理时对应蛋白点作为阴性对照，并进行吸光值检测；筛选所述吸光值＜100%，且显著性差异p＜0.01的蛋白点为抗生素结合蛋白；    或者，S2所述抗生素检测采用直接测定法，筛选抗生素含量≥5倍阴性对照，且显著性差异p＜0.01的蛋白点为抗生素结合蛋白；所述阴性对照为生理盐水处理时对应蛋白点；    S1所述抗生素的浓度≥4倍的最小抑制浓度，且抗生素的浓度≤杀死所述生物体的浓度。