双链DNA的人工合成方法

摘要

本发明属于分子生物学领域，具体的说是双链DNA人工合成方法，利用半导体芯片技术，使用flank序列进行第一轮PCR扩增，使半导体芯片所合成的核苷酸大量增加，配合Type IIs型限制性内切酶和T4 DNA连接酶边切边连，达到合成双链DNA的目的。本发明可以一次性合成高达上百万条引物，合成成本低。本方法特别适用于大规模高通量的合成双链DNA的研究包括但不限于代谢通路，生物途径，蛋白质定向进化以及基因组合成与组装等。

主权项

双链DNA的人工合成方法，其特征是，包括如下步骤：1)将目标DNA划分成多个长度为200‑1000bp的核苷酸片段；2)在核苷酸序列的5’端添加前一核苷酸序列3’端的末端四个碱基，首条核苷酸序列5’端不添加，添加后的核苷酸序列长度为30‑90nt；3)在核苷酸序列的两端分别加上TypeⅡs限制性内切酶的酶切识别序列，然后在这一序列的两端再添加长度为20nt的flank序列；4)将步骤3)中的核苷酸序列利用半导体芯片，采用电化学方法，以flank序列为引物进行PCR扩增，获得高通量合成的核苷酸序列；5)采用Type IIs限制性内切酶BsaI对PCR扩增产物进行酶切，与此同时，利用T₄DNA连接酶将各个片段连接起来，获得双链DNA，即得到目标DNA分子。