麒麟尾种苗组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种麒麟尾种苗组培快繁方法，其通过外植体选择培育，无菌材料获得，无菌材料的驯化与继代扩繁，及壮苗生根培养四五个步骤实现。本发明在4-10月份，当母株抽出3-5个节，且新萌发的顶芽长度约10-40mm时，采集母株新萌发的10-20mm的顶芽或侧芽作为外植体，并对诱导、扩繁、壮苗、生根的培养基进行优化改良，继代团块切割时对芽粗度大于2.5mm的粗芽按2-4芽/团进行切割，芽粗度小于或等于2.5mm的细小芽则以8-10mm的团块直径进行切割，并对组培苗各阶段的培养条件进行了优化，保证其培养能够稳定生长。通过本发明方法，在短期内即可获得大量优质苗木。

主权项

麒麟尾种苗组培快繁方法，其特征在于：通过以下步骤实现：一、外植体选择培育按常规管理母株，在4‑10月份，当母株抽出3‑5个节，且新萌发的顶芽长度10‑40mm时，采集母株新萌发的顶芽或侧芽作为外植体，采集的外植体长度10‑20mm；二、无菌材料获得：将采集好的外植体清洁漂洗后，切去截面变色部分，接种于培养基中进行第一代无菌材料的培养；此培养基采用MS改良培养基，并添加有柠檬酸80‑100mg·L^‑1，6‑苄基腺嘌呤(6‑BA)1.0‑5.0mg·L^‑1，糠基腺嘌呤(KT)1.0‑4.0mg·L^‑1，a‑萘乙酸(NAA)0.1‑0.5mg·L^‑1，蔗糖30‑40g·L^‑1和卡拉胶4.5‑6.5g·L^‑1，调整pH值为5.6‑6.0，后进行灭菌；培养条件：温度26±1℃，光照12±2H/D,光强3.75‑6.25μmol·m^‑2·s^‑1，湿度40‑70％，培养周期4‑5周；三、无菌材料的驯化与继代扩繁：(一)无菌材料的驯化第一代无菌材料培养后当新芽抽出长度大于20mm时，去顶留8‑10mm，如侧芽分化时，以2‑4芽/团进行方向性切割，将切割好的芽团接种于培养基中进行驯化培养，此培养基采用MS改良培养基，并添加有柠檬酸80‑100mg·L^‑1、6‑BA1.0‑3.0mg·L^‑1、KT2.0‑4.0mg·L^‑1、NAA0.1‑0.5mg·L^‑1、蔗糖30‑40g·L^‑1和卡拉胶4.5‑6.5g·L^‑1，调整pH值为5.6‑6.0，后进行灭菌；培养条件：温度26±1℃，光照12±2H/D,光强18.75‑22.5μmol·m^‑2·s^‑1，湿度40‑70％，培养周期4‑6周；按上述方式进行4‑5次驯化培养后即完成驯化，进入扩繁阶段；(二)无菌材料的继代扩繁进入扩繁阶段的材料每个芽团有12‑20个芽，对芽粗度大于2.5mm 的粗芽按2‑4芽/团进行切割，并采用对剖方式破坏其生长点，若新芽抽出长度大于20mm，去顶留8‑10mm；对芽粗度小于或等于2.5mm的细小芽则以8‑10mm的团块直径进行切割，将切割好的芽团接种于MS改良培养基中进行扩繁培养，并在MS改良培养基中添加柠檬酸80‑100mg·L^‑1，6‑BA0.1‑3.0mg·L^‑1、KT2.0‑4.0mg·L^‑1、NAA0.1‑0.5mg·L^‑1、蔗糖30‑40g·L^‑1和卡拉胶4.5‑6.5g·L^‑1，调整pH值为5.6‑6.0，后进行灭菌；培养条件：温度26±1℃，光照12±2H/D,光强18.75‑22.5μmol·m^‑2·s^‑1，湿度40‑70％，培养周期5‑6周；四、壮苗生根培养：(一)壮苗培养将经扩繁培养后的芽团按2‑4芽/团方向性切割后，将切下的团块接种到壮苗培养基中，壮苗培养基采用MS改良培养基，并添加柠檬酸80‑100mg·L^‑1，KT0.5‑1.0mg·L^‑1、NAA0.1‑0.3mg·L^‑1、蔗糖30‑40g·L^‑1和卡拉胶4.5‑6.5g·L^‑1，调整pH值为5.6‑6.0，后进行灭菌；培养条件：温度26±1℃，光照14±2H/D，光强18.75‑22.5μmol·m^‑2·s^‑1，湿度40‑70％，培养周期5‑6周；(二)生根培养当团块上的芽长度达15‑20mm、具有两片完整叶且叶片平展时，按单芽进行切割，切下来的单芽接种到生根培养基中进行生根培养，生根培养基采用MS改良培养基，并添加柠檬酸80mg·L^‑1，吲哚丁酸(IBA)1‑3mg·L^‑1、NAA0.2‑0.5mg·L^‑1、活性炭100‑300mg·L^‑1、蔗糖40g·L^‑1和卡拉胶4.5‑6.5g·L^‑1，调整pH值为5.6‑6.0，后进行灭菌；培养条件：温度26±1℃，光照时间14±2H/D，光强25‑31.25μmol·m^‑2·s^‑1，湿度40‑70％；生根培养14D后开始长根，6‑8周后长根率达95％，根数3‑6条，植株高度达30‑65mm，具有3片完整叶，长势健壮；上述各步骤中的MS改良培养基是指在常规的MS培养基中添加220 mg·L^‑1Ca(NO₃)₂·4H₂O，且KNO₃用量由1900mg·L^‑1增加到2100mg·L^‑1。