一种基于纳米金增强的多种肺癌标志物的高灵敏检测方法

摘要

本发明是一种基于纳米金增强的多种肺癌标志物。高灵敏度检测方法，检测步骤为：1)先将各待测蛋白质的捕捉抗体点样到醛基修饰的基片上；2)然后在纳米金上标记上待测蛋白的多克隆或单克隆检测抗体；3)将标记好待测蛋白质捕捉抗体的蛋白芯片及纳米金生物复合探针与待测蛋白质样品混合，37℃孵育一段时间，洗去没有反应的纳米金探针；4)加入金增强反应液，肉眼或显微镜下观察、或用CCD扫描拍照，根据灰度值测定相应的蛋白浓度。本发明提供的方法可广泛应用于临床诊断、肿瘤转移监测、抗原、抗体、核酸的检测、卫生检疫、环境检测等领域，检测蛋白质的灵敏度达pg/ml级。

主权项

一种以非诊断为目的的CEA和P53的高灵敏度检测方法，其特征在于所述方法的具体步骤为：(a)蛋白芯片的制作将CEA和P53蛋白的单克隆抗体点样到醛基修饰的玻璃基片上，室温过夜，置4℃保存备用；(b)纳米金生物复合探针的制备在pH6～9情况下，根据胶体金凝集实验确定CEA、P53蛋白的检测抗体的用量，并将各浓度的抗体与纳米金溶液室温条件下混匀1‑5小时，再加入0.1‑20％质量的聚乙二醇，4℃过夜，离心，洗去未标记上的抗体，用纳米金重悬液重悬标记好的纳米金生物复合探针，置4℃保存备用，所述纳米金重悬液含0.25‑10％的牛血清白蛋白BSA、0.1‑1％的聚乙烯吡咯酮PVP、1.5‑10％的蔗糖、0.01‑1％聚乙二醇PEG和0.2‑1％的吐温Tween20；(c)免疫反应将标记好CEA、P53抗体的蛋白芯片及纳米金生物复合探针与待测样品混合，37℃孵育30‑60分钟，然后再洗去没有反应的纳米金探针；(d)显色反应加入金增强反应液后，室温轻摇3‑10min，肉眼观测或用CCD拍照，有褐色点出现的为阳性结果，所述金增强反应液含0.1‑100mM的次氯金酸HAuCl·3H₂O、0.1‑100mM的盐酸羟胺和1‑10％明胶Gelatin。