一种天牛科幼虫不同家系的分子标记方法

摘要

本发明公开了一种天牛科幼虫不同家系的分子标记方法，采用以下步骤实现：选用两对特异性引物进行PCR反应，从待测不同家系的天牛个体及亲本，采用DNA提取法提取基因组DNA；用基因组DNA为模板，所选的两对引物分别进行两轮PCR扩增；PCR产物用1.5%琼脂糖电泳检测，溴化乙锭染色后紫外线下观察并拍照电泳结果；用邻接法构建系统发育树。本发明对33种天牛COI基因的遗传距离表明：不同属间遗传距离明显大于同属间遗传距离，COI基因完全符合DNA条形码有效性的检验标准，该片段可以较好的区分天牛的不同属的不同种类，可用于天牛科的快速鉴定。

主权项

一种天牛科幼虫不同家系的分子标记方法，其特征在于，采用以下步骤实现：1）选用两对特异性引物进行PCR反应，所述两对特异性引物为上游引物J173：5’‑ TAACAGCACATGCTTTTGTA‑3’下游引物J1331：5’‑GGATAGTCTGAGTATCGTCG‑3’；上游引物J1718：5’‑GGAGGATTTGGAAATTGATTAGTTCC‑3’下游引物N2191：5’‑CCCGGTAAAATTAAAATATAAACTTC‑3’；2）从待测不同家系的天牛个体及亲本，采用DNA提取法提取基因组DNA；3）用步骤2）的基因组DNA为模板，步骤1)所选的两对引物分别进行两轮PCR扩增；4）对步骤3）的PCR产物用1.5 %琼脂糖电泳检测，溴化乙锭染色后紫外线下观察并拍照电泳结果，剩余部分送上海金斯瑞有限公司纯化并测序；5）获得的DNA序列先提交到GenBank数据库中，然后利用BLAST工具进行相似性检索，并确定片段方向；用GenDoc软件进行序列同源性比较；用MEGA5.0软件，计算各物种间的遗传距离，转换和颠换值及其比值，保守位点及变异位点等数值，用邻接法构建系统发育树，根据个体间的遗传距离聚类结果，区分来自不同家系的个体。