一种蛋白质烷基化修饰剂PEG修饰能力的检测方法及其应用

摘要

本发明公开了一种蛋白质烷基化修饰剂PEG修饰能力的检测方法及其应用。本发明方法设置GSH经修饰剂修饰与GSH不经修饰两组，分别用5,5－二硫代对二硝基苯甲酸（DTNB）为显色剂，利用分光光度计测定在波长412nm下两组反应体系的吸光值，根据两组吸光值的差异来检测蛋白质氨基PEG化修饰剂的修饰能力。本发明进行修饰剂修饰能力的检测，既能实现定性检测又能实现定量检测，整个测定过程在60min内可完成，具有快速、简便、可靠的有益效果。

主权项

一种蛋白质烷基化修饰剂聚乙二醇的修饰能力的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.测定组：按照2:1的摩尔比分别准备活化的蛋白质烷基化修饰剂聚乙二醇与谷胱甘肽溶液；对照组：谷胱甘肽溶液；S2.将S1测定组准备好的修饰剂与谷胱甘肽溶液进行反应，反应体系的pH值采用0.1mol/L pH9.0的巴比妥钠‑盐酸缓冲溶液调节为9.0、反应温度为45℃、反应时间为40min；S3.S2所述反应结束后分别在测定组和对照组加入显色剂5,5'二硫代双（2‑硝基苯甲酸）得到混合体系，在波长412nm下于3～6min内分别测定混合体系的吸光值；S4.根据S3测定的测定组和对照组的吸光值差异判断和/或计算出修饰剂的修饰能力；其中，步骤S1所述修饰剂的活化包括以下步骤：S11.用无水苯重结晶三聚氰氯；S12.取S11处理的三聚氰氯溶解于含无水碳酸钠的无水苯中，加入单甲氧基聚乙二醇mPEG，室温下搅拌过夜后过滤；取滤液在搅拌下加入乙醚，得白色沉淀，继续搅拌后抽滤，所得沉淀用无水苯溶解；上述沉淀、溶解重复操作多次，直到紫外检测无三聚氰氯的吸收峰为止；S13.将S12处理的mPEG真空抽干后得到白色粉末的活化mPEG，密封冷藏保存备用。