NK细胞体外培养方法

摘要

本发明公开了一种NK细胞体外培养方法，属于人类细胞的培养。本发明用PBS稀释的赫赛汀与用PBS稀释人免疫球蛋白，合并后均匀铺满培养瓶底，过夜；另取外周血行密度梯度离心，吸取单个核细胞，加入无血清培养基，调整细胞浓度为1.0×10⁶/ml-3.0×10⁶/ml；然后加入细胞因子IL-2、IL-15，加入到用赫赛汀包被的培养瓶中，孵箱培养。这样在保证了各个细胞亚群扩增倍数的基础上，促进NK细胞的生长和增殖，增强了淋巴细胞的杀伤活性，无血清培养基替代含血清的完全培养基，所得培养产物的数目和细胞活性相当，实现对NK细胞体外大规模培养，用于NK细胞的临床生物治疗，可以增加其临床应用的安全性。

主权项

一种NK 细胞体外培养方法，该方法是按照以下步骤进行的：a. 用PBS 稀释Herceptin 至浓度0.85‑1.05mg/ml，取910μl ；用PBS 稀释人免疫球蛋白至浓度1‑2mg/ml，取400μl，合并后再用PBS 补齐至20ml，均匀铺满培养瓶瓶底，密封置于4℃冰箱中过夜，次日取出，将液体倒出，用PBS 洗2 遍；b. 取外周富集血4‑10ml，用Ficoll 法进行密度梯度离心, 离心速度为350×g，离心时间为15‑20 分钟，吸取中间界面层的单个核细胞，用PBS 洗涤3 次，加入无血清培养基，调整细胞浓度为1.0×10⁶/ml‑3.0×10⁶/ml ；然后加入细胞因子IL‑2 至终浓度10ng/ml，IL‑15至终浓度50ng/ml，加入到已经用Herceptin 包被的培养瓶中，37℃，5% CO₂ 孵箱中连续培养15 天，每3 天补加含20ng/ml 的IL‑2 和100ng/ml 的IL‑15 的无血清培养基一次，补液量与补液前液体量相同，即补液后体积为补液前的2 倍。