一种复配反胶束体系纯化棉子蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种复配反胶束体系纯化棉子蛋白的方法，方法如下：称取粉碎后的棉籽粕，以料液比为0.15g/ml加入复配反胶束溶液中，经过60min的水浴恒温震荡或超声，高速离心15min，除去不溶固形物，得到含有蛋白的前萃液，是为前萃。取20ml前萃液加入等体积量的1.2mol/L的KCl水溶液，水浴恒温震荡90min，3000r/min离心15min得到上层含有表面活性剂的油相和下层含有蛋白的水相，经分液漏斗分离得到下层蛋白水溶液，即为后萃液，该过程即为后萃。将得到的后萃液浓缩，喷粉干燥或冷冻干燥得到纯化棉子蛋白。本发明具有操作简单，反应条件温和，无酸碱排放，生产成本低，且所用反胶束溶液具有类生命水核，能够保持目标产物的特性和营养成分不受损害。

主权项

一种复配反胶束体系纯化棉子蛋白的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：(1)备料：将棉籽粕，粉碎备用；(2)配制复配反胶束溶液：将丁二酸二异辛酯磺酸钠与十二烷基硫酸钠置于容器中，丁二酸二异辛酯磺酸钠与十二烷基硫酸钠的重量比为4:2‑5，然后加入异辛烷和正辛醇混合溶剂，混合溶剂与丁二酸二异辛酯磺酸钠的体积重量比为20‑30:1ml/g，然后在磁力搅拌器上搅拌至完全溶解后，加入浓度为0.05mol/L的KH₂PO₄‑Na₂HPO₄缓冲液，缓冲液的加入量与丁二酸二异辛酯磺酸钠的体积重量比为2‑3:2ml/g，缓冲液的pH在5.0‑8.0，然后转移至恒温振荡器以180r/min的速率震荡至澄清透明，静置12h后能保持澄清透明即可；(3)前萃：以0.15‑0.3g/mL的料液比将棉籽粕加入复配反胶束溶液中，pH控制在6.0‑7.5，经过30‑90min的水浴恒温震荡或超声，萃取温度为30‑50℃，然后高速离心除去不溶固形物，得到含有蛋白的前萃液；(4)后萃：取步骤(3)制备的前萃液，加入等体积量浓度为1‑1.4mol/L的KCl水溶液，pH控制在7.0‑9.0，然后水浴恒温震荡60‑120min，萃取温度为30‑50℃，高速离心10‑20min，得到上层含有表面活性剂的油相和下层含有蛋白的水相，经分液漏斗分离得到下层蛋白水溶液，即为后萃液；(5)精制：将步骤(4)得到的后萃液浓缩，然后喷粉干燥或冷冻干燥得到纯化棉子蛋白；步骤(2)中，丁二酸二异辛酯磺酸钠与十二烷基硫酸钠的重量比为4:3；步骤(2)中，异辛烷与正辛醇的体积配比为3‑5：1，混合溶剂与丁二酸二异辛酯磺酸钠的体积重量比为25:1ml/g；步骤(2)中，缓冲液的加入量与丁二酸二异辛酯磺酸钠的体积重量比为3:2ml/g。