一种基于酶联免疫分析的HPV核酸检测试剂盒及其应用

摘要

本发明属于分子生物学、免疫学及核酸化学技术领域,具体涉及一种基于酶联免疫分析的HPV核酸检测试剂盒及其应用。该试剂盒基于一种利用Sdr单克隆抗体检测高危HPV16型E6、E7RNA的免疫检测方法，检测过程不需反转录和PCR等技术对靶序列进行扩增，而是利用不需标记的DNA探针与HPV16型E6、E7RNA进行杂交，形成DNA：RNA杂合体，然后利用Sdr单克隆抗体对杂合体进行识别和后续的信号放大。检测方法具有快速、低成本、高灵敏、不需复杂的扩增和检测仪器，以及可检测初始病毒载量的优点。

主权项

一种基于酶联免疫分析的HPV16型E6、E7 RNA检测试剂盒，其特征是试剂盒的组成部分为：(1)预包被的酶标板：PLL处理的聚苯乙烯微孔板，BSA封闭，储藏条件为4℃，保质期半年；(2)探针混合液1：针对HPV16 E6 RNA片段的探针组合，E6 DNA1、E6 DNA2、E6 DNA3，浓度均为10μM ；探针混合液1探针E6 DNA1：SEQ ID NO5，序列(5’‑3’)：GCTCTGTGCATAACTGTGGTAACTTTCTGGGTCG；探针混合液1探针E6 DNA2：SEQ ID NO6，序列(5’‑3’)：TCCCGAAAAGCAAAGTCATATACCTCACGTCGCAGTAACT；探针混合液1探针E6 DNA3：SEQ ID NO7，序列(5’‑3’)：CAGCTGGGTTTCTCTACGTGTTCTTGATGATCTGCAACAA；(3)探针混合液2：针对HPV16 E7 RNA片段的探针组合，E7 DNA1、E7 DNA2，浓度均为10μM ；探针混合液2 E7 DNA1：SEQ ID NO8，序列(5’‑3’)：TACGCACAACCGAAGCGTAGAGTCACACTTGC；探针混合液2 E7 DNA2：SEQ ID NO9，序列(5’‑3’)：AGTGTGCCCATTAACAGGTCTTCCAAAGTACGAATGTCTACGTGTGTGC；(4)10×退火缓冲液：Tris‑HCl 100mM，pH 7.5，EDTA 10mM，NaCl 1M；(5)针对DNA‑RNA的鼠源单克隆抗体Sdr溶液；(6)针对Sdr的酶标二抗溶液；(7)底物显色溶液：TMB溶液；(8)洗涤缓冲液：10×PBS溶液；(9)反应终止液：2M H₂SO₄。