对血浆游离DNA进行多目标位点扩增建库的方法

摘要

本发明公开了一种对血浆游离DNA进行多目标位点扩增建库的方法，依次包括以下步骤：1)、末端修复和加A；2)、接头连接：在步骤1)所得的末端加A的DNA片段中加入已退火形成环状发夹结构的接头DNA，从而获得两侧结合上环状发夹接头后的双链DNA；当步骤1)中提取纯化的血浆游离DNA的量≤10ng时，进行步骤3)；反之，当步骤1)中提取纯化的血浆游离DNA的量＞10ng时，直接进行步骤4)；3)、在步骤2)所得的加好接头的DNA中加入特异性引物I、Phi29酶和缓冲液，进行线性扩增；4)、PCR扩增：所述扩增产物构成游离DNA突变位点富集测序文库。

主权项

对血浆游离DNA进行多目标位点扩增建库的方法，其特征是依次包括以下步骤：1)、末端修复和加A：从而获得末端加A的DNA片段；2)、接头连接：包括在步骤1)所得的末端加A的DNA片段中加入已退火形成环状发夹结构的接头DNA，从而获得两侧结合上环状发夹接头后的双链DNA；所述环状发夹结构的接头DNA由环状接头序列、两侧互补序列构建而成；当步骤1)中提取纯化的血浆游离DNA的量≤10ng时，进行下述步骤3)；反之，当步骤1)中提取纯化的血浆游离DNA的量＞10ng时，直接进行下述步骤4)；3)、在步骤2)所得的加好接头的DNA中加入特异性引物I、Phi29酶和缓冲液，在36.8～37.2℃进行线性扩增0.5～3小时；4)、PCR扩增：在步骤2)所得的连接接头后的DNA中或步骤3)所得的经过扩增的DNA中加入特异性引物II和通用引物以及带有index的测序接头引物P5和P7，进行14～30轮PCR循环扩增，获得扩增产物，所述扩增产物构成游离DNA突变位点富集测序文库。