促进骨髓间充质干细胞成骨再生关键基因高表达的方法

摘要

本发明涉及一种促进骨髓间充质干细胞成骨再生关键基因高表达的方法，步骤如下：骨髓间充质干细胞的分离：获取无菌的骨髓，经过前处理用培养液重悬沉淀，计数，以1×10⁶/cm²接种至培养瓶中培养，培养液分别采用a-MEM+10％FBS和a-MEM+5％血小板裂解物+50mg/ml抗坏血酸+10nmol/L胰高血糖素样肽-1。采用本发明的培养体系培养的骨髓间充质干细胞作为种子细胞用于骨组织工程治疗骨缺损，避免了骨髓间充质干细胞体外成骨诱导的步骤，为临床应用骨组织工程治疗骨缺损缩短了至少14天的时间。

主权项

一种促进骨髓间充质干细胞成骨再生关键基因高表达的方法，其特征在于：步骤如下：⑴骨髓间充质干细胞的分离：获取无菌的骨髓，无菌条件下1500rpm离心5min；弃去上清液，使用无菌磷酸缓冲液反复冲洗，1500rpm离心5min，弃上清；磷酸缓冲液等倍稀释混匀沉淀，缓慢添加到淋巴分离液上，2000rpm离心20min；收集白膜层单核细胞于新的无菌的离心管内，磷酸缓冲液清洗，1500rpm离心5min；弃上清，用培养液重悬沉淀，计数，以1×10⁶/cm²接种至培养瓶中培养，培养液分别采用a‑MEM+10％FBS和a‑MEM+5％血小板裂解物+50mg/ml抗坏血酸+10nmol/L胰高血糖素样肽‑1；⑵骨髓间充质干细胞的消化、传代，待骨髓间充质干细胞长至80％时，采用0.05％的胰蛋白酶+0.02％的EDTA对其进行消化，以1×10⁴cells/cm²传至新的培养瓶中。