一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的制备方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的制备方法，所述制备方法为利用PET表达载体对人类TRAIL基因(114-281序列)进行基因克隆制作出具有N-末端组氨酸标签(Histidine tag)和异亮氨酸拉链基序(Leucine zipper)的TRAIL重组基因(PET23dw-His-ILZ-hTRAIL_114-281，简称HZ-TRAIL)。本发明的制备方法具有产物活性高、产量高、性能稳定、不易变形的优点，本发明方法所制备的重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白可以诱导多种癌细胞的凋亡，而对正常组织和细胞无任何副作用。在RA发病过程中通过诱导炎性淋巴细胞的凋亡，降低炎症反应，对关节起保护作用。对抗肿瘤和抗类风湿关节炎具有高药效的优点。

主权项

一种重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：步骤一：HZ‑TRAIL的制备：利用PET表达载体对人类TRAIL蛋白中114‑281基因序列进行基因克隆，制备出具有N‑末端组氨酸标签和异亮氨酸拉链基序重组基因PET23dw‑His‑ILZ‑h TRAIL_114‑281的TRAIL重组蛋白，简称HZ‑TRAIL；步骤二：HZ‑TRAIL的提取和纯化：将步骤一制备出的HZ‑TRAIL转化到大肠杆菌中，并在含有1mmol/L异丙基硫代半乳糖苷的LB培养液中进行扩繁处理，然后将HZ‑TRAIL在大肠杆菌中重组表达，大肠杆菌细胞通过声波降解法裂解，并离心处理后，取20ml上清液缓慢注入到镍‑氮三乙酸螯合琼脂糖柱中，使HZ‑TRAIL中的组氨酸和金属镍离子充分吸附，利用镍‑亲和色谱法进行逐步洗脱提取HZ‑TRAIL，再经凝胶过滤层析法进行纯化，保存在‑20℃。