一种基于CATH-1基因判断云南地方鸡抗病能力强弱的方法

摘要

本发明涉及一种基于CATH-1基因判断云南地方鸡抗病能力强弱的方法，属于动物分子育种的基因工程技术领域；所述的基于CATH-1基因判断云南地方鸡抗病能力强弱的方法包括以下具体步骤为：1）总RNA的提取；2）RNA沉淀的清洗；3）RNA的溶解；4）总RNA纯度、浓度及完整性检测；5）总RNA电泳检测；6）PCR引物设计；7）检测CATH-1基因的相对表达量，基于CATH-1基因判断云南地方鸡抗病能力的强弱，在脾脏、胸腺、法氏囊三个组织中的相对表达量高的云南地方鸡更容易遭受环境变化、病原微生物感染，在脾脏、胸腺、法氏囊三个组织中的相对表达量低的云南地方鸡免疫机能较强。

主权项

一种基于CATH‑1基因判断云南地方鸡抗病能力强弱的方法，其特征在于：所述的基于CATH‑1基因判断云南地方鸡抗病能力强弱的方法包括以下具体步骤：1)RNA的提取①选取同一批次出壳的健康鸡只100只进行隔离饲养，提取各个鸡只中的RNA，将超低温冻结的RNA提取样品称量后转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状；②将匀浆液转移至离心管中；③向匀浆裂解液中加入氯仿，紧盖离心管盖，混合至溶液乳化呈乳白色；④室温静置5分钟；⑤在4℃条件下离心15分钟，从离心机中取出离心管，此时匀浆液分为三层，即：无色含RNA的上清液、中间为DNA的白色蛋白层及带有颜色的下层有机相；⑥吸取上清液转移至另一个离心管中，向上清液中加入0.5‑1倍RNAiso Plus体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀后，室温下静置10分钟；⑦12 000rpm 4℃离心10分钟；2)RNA沉淀的清洗弃去上清液，加入与RNAiso Plus等量的75％乙醇，上下颠倒洗涤离心管管壁，7 500g rpm 4℃离心5分钟后小心弃去上清；3)RNA的溶解打开离心管盖，室温干燥沉淀，沉淀干燥后，加入RNase‑free水溶解沉淀，最后将RNA溶液贮存于‑80℃；4)总RNA纯度、浓度及完整性检测取1μL总RNA溶于99μL无RNase水中，用蛋白质核酸检测仪测总RNA在OD260nm、OD280nm的吸光值，并求出两者的的比值；5)总RNA电泳检测取3μL总RNA样品经1％琼脂糖凝胶电泳20min后，在凝胶紫外线投射仪下观察电泳结果；6)PCR引物设计根据GenBanK中原鸡(Gallus gallus)的相关基因序列，使用引物设计软件primer 5.0设计引物，并合成，合成后用荧光定量PCR；7)检测CATH‑1基因的相对表达量检测云南地方鸡脾脏、胸腺、法氏囊三个组织中CATH‑1基因的相对表达量。