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一种台湾肖楠幼嫩叶片快速繁殖无菌苗的方法，其特征在于：按下列步骤进行：1）外植体培育：将台湾肖楠种植于有腐殖土中备用，待需要外植体材料时，用不锈钢剪刀剪取位于顶端新长出的叶片，作为外植体材料来源；2) 无菌苗获取：剪取的外植体材料，置于洗净的烧杯中，滴入1‑3滴普通洗洁精，1滴吐温20，盖上纱布并绑扎好，置于自来水下流水冲洗3‑5h；冲洗后的外植体材料于超净工作台上，先用75%酒精浸泡50s，用无菌水冲洗3次，而后将冲洗后的外植体用灭菌后的镊子放入0.1%的升汞中消毒8min，无菌水冲洗6次，每次1.5min，然后将外植体放入事先准备好的无菌培养皿内，用无菌滤纸吸干材料上残留的水分，接种前将叶片用无菌不锈钢刀片切成1.5cm的小段，然后将切好的外植体接种到过渡培养基中，所述的过渡培养基是以MS为基本培养基，不添加肌醇和蔗糖，添加5~7g/L琼脂、0.01~3.0mg/L的NAA，待在过渡培养基中培养15~20d时，挑取无污染的外植体进行愈伤组织诱导；3）愈伤组织诱导：将过渡培养基中无污染的外植体转接到愈伤组织诱导培养基培养，所述的愈伤组织诱导培养基，以MS为基本培养基，添加0.01mg/L~3.0mg/L的NAA、0.01~2.0mg/L2,4‑D、0.01~1.0mg/L的6‑BA、25g/L的蔗糖，接种时外植体横放，并轻压外植体材料使之与培养基充分接触；培养室温度25℃，湿度70%，光照强度2200lx，每天光照时间12h，7d后可见米白色疏松愈伤组织从切口处长出，待愈伤组织长到1.5cm左右宽时，转入丛生芽诱导培养基培养；4）丛生芽诱导与增殖：将疏松、嫩绿色、长势良好的愈伤组织转接于再分化培养基上，所述的再分化培养基，以WPM为基本培养基,添加0.01~1.0mg/L的NAA、0.01mg/L~2.0mg/L的TDZ、0.01~1.5mg/L的KT、0.01mg/L~1.5mg/LGA<sub>3</sub>、30g/L的蔗糖，用镊子轻压愈伤组织使之与培养基充分接触，培养室温度25℃，湿度70%，光照强度2200lx，每天光照时间12h，培养30d后，可见丛生芽大量长出，继续培养35d，可得分化良好，长势旺盛的丛生苗；5) 壮苗培养：截取高4~5cm的丛生苗，接种于壮苗培养基上，所述的壮苗培养基：以WPM为基本培养基，添加0.01~3.0mg/L的NAA、0.01mg/L~2.0mg/L的IBA、5‑10mL的香蕉汁、30g/L的蔗糖，以该WPM为基本培养基，培养室温度25℃，湿度70%，光照强度2200lx，每天光照时间12h，培养14d后得健壮的台湾肖楠无菌苗。 |
