一种WAP基因在果蝇转基因中的应用

摘要

本发明涉及一种WAP基因在果蝇转基因中的应用，本发明通过把对虾中的WAP基因构建在果蝇中，使WAP基因在果蝇中得到表达，本发明制备的转基因果蝇具有抗菌的作用。

主权项

一种WAP基因在果蝇转基因中的应用，其特征在于，包括以下步骤：转基因果蝇的构建：根据WAP基因的ORF两端序列，设计一对上下游引物Wap‑f和Wap‑r，并在上下游引物的5’端分别引入kpn I与xba I酶切位点，引物序列如下： Wap‑f：5’‑‑‑GG GGTACCATGGTGAACATCAAGGAAGTTC ‑‑‑3’Wap‑r：5’‑‑GCTCT AGATCATTTTCCGTAGGGAGATCCCA‑‑‑3’    以中国对虾血细胞cDNA为模板，PCR钓取WAP片段，利用kpnⅠ和 xbaⅠ两个酶切位点，与pUAST质粒定向连接，构建真核表达载体wap/pUAST，经PCR验证和测序验证该质粒中插入的WAP片段序列正确后，将wap/pUAST与Δ2‑3 辅助质粒一起显微注射入白眼的野生型黑腹果蝇W¹¹¹⁸的胚胎中，在Δ2‑3 辅助质粒上转座子P元素的协助下，WAP基因被随机整合到果蝇胚胎极细胞的基因组中，极细胞将来发育成生殖腺，注射成功的胚胎发育的G0代成蝇会产生带wap转基因的配子，当G0成蝇与W¹¹¹⁸果蝇杂交时，杂交子代中会出现wap转基因成功的红眼果蝇，因为，wap/pUAST上有mini‑white标志基因，使果蝇复眼呈现红色，依此筛查，便得到红眼的转基因果蝇品系；利用PCR，从转基因果蝇品系基因组中检查到了WAP基因片段，证明WAP转基因果蝇构建成功；所述的WAP基因为中国对虾含单一乳清酸性蛋白结构域的抗菌肽基因；其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示； 所述的kpn I的核苷酸序列为 GGTACC； 所述的xba I的核苷酸序列为 TCTAGA。