基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法

摘要

基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法，属于材料化学技术领域。本发明主要内容为首先合成不同粒径25nm和10nm的金纳米粒子，通过对金纳米粒子表面引物偶联量的可控修饰，达到金纳米粒子在PCR体系中的稳定性，并对金纳米粒子-引物偶联物用PEG₁₀₀₀进行修饰。在合适的PCR条件下，进行大小金的链状可控组装，并对可控组装产物进行TEM表征和CD信号研究比较。本发明首次通过PCR方法进行了大金和小金的链状可控组装，并首次对不同循环数下PCR组装的不同长度链状组装产物的手性性质进行了研究和探讨。

主权项

一种基于聚合酶链反应的大小金链状可控组装产物手性研究的方法，其特征在于包括大金纳米粒子和小金纳米粒子的合成，其表面的引物修饰，金纳米粒子‑引物偶联物的稳定，不同长度的链状可控组装，组装产物的手性性质表征；具体步骤：（1）25 nm金纳米粒子合成采用柠檬酸三钠还原氯金酸合成25 nm金纳米粒子；（2）10 nm金纳米粒子合成采用单宁酸还原氯金酸合成10 nm金纳米粒子；（3）金纳米粒子和引物的偶联将新合成的25nm金纳米粒子和巯基修饰的上游引物F‑primer偶联，新合成的10nm金纳米粒子和巯基修饰的下游引物R‑primer偶联，分别形成金纳米粒子‑引物偶联物；F‑primer：5’ ‑SH‑(CH₂)₆‑TGGCTGACCCTGATGAGTTCG‑3’，扩增长度为50bp；R‑primer：5’ ‑SH‑(CH₂)₆‑GGGCCATGATTACGCCAGTT‑3’，扩增长度为50bp；（ⅰ）将步骤（1）中制备好的1mL 2nM 25nm金纳米粒子及步骤（2）中制备好的1mL 10nM 10nm金纳米粒子分别以7000rpm、13000rpm离心10min，弃上清，分别重悬在100μL的超纯水中，4℃保藏、待用；（ⅱ）25nm金纳米粒子和上游引物F‑primer偶联：取（ⅰ）制备好的50μL 25nm金纳米粒子加入50μL 200nM的F‑primer，混匀，室温反应12h；（ⅲ）10nm金纳米粒子和下游引物R‑primer偶联：取（ⅰ）制备好的50μL 10nm金纳米粒子加入50μL 1μM的R‑primer，混匀，室温反应12h；（ⅳ）将上述（ⅱ）和（ⅲ）步骤中反应溶液分别在7000rpm、13000rpm离心10 min，弃上清，后用50μL的超纯水分散沉淀，4℃保藏、待用；（4）金纳米粒子‑引物偶联物的稳定将金纳米粒子‑引物偶联物和巯基修饰的聚乙二醇PEG₁₀₀₀反应，以稳定金纳米粒子；（5）链状可控组装以λDNA为模板，通过优化PCR扩增条件，将金纳米粒子‑引物偶联物在PCR体系中进行不同循环数下的可控组装，离心浓缩，得组装产物；（6）组装产物的TEM和手性性质表征组装产物进行TEM和CD表征。