一种检测黄曲霉及烟曲霉的通用引物及实时荧光tHDA试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测烟曲霉及黄曲霉的通用引物及实时荧光tHDA试剂盒。本发明的检测烟曲霉及黄曲霉的通用引物能够同时检测扩增出烟曲霉及黄曲霉，同时结合了实时荧光tHDA技术，较其他普通的PCR相比，能够在恒温下进行扩增，省去了变性、退火、延伸等步骤，直接模拟生物体环境进行解旋扩增，有利于简化设备，利于在基层推广。使用本发明的试剂盒，其检测限可达到10⁴copies(拷贝)/ml，可用于临床。能够检测出临床上最常见的两种曲霉菌感染，不但为临床节省大量宝贵的抢救时间，而且成本低廉、操作方便，具有广阔的运用前景。

主权项

一种检测曲霉菌感染的实时荧光tHDA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下组分：(1)DNA提取试剂；(2)tHDA反应液，其中包括：tHDA缓冲液、MgSO₄、NaCl、dNTP、引物Ⅰ、引物Ⅱ，其中，所述引物Ⅰ的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，所述引物Ⅱ的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示；(3)酶混合物，其中包括：热稳定DNA解旋酶、Bst聚合酶和热稳定性单链结合蛋白ET SSB；(4)荧光染料；(5)阴性对照：为无插入烟曲霉或黄曲霉的特异性片段的pUC18‑T载体质粒；(6)阳性对照：为含有烟曲霉或黄曲霉DNA的样本；；(7)标准品：为插入有烟曲霉或黄曲霉的特异性片段的pUC18‑T载体质粒；(8)灭菌纯水。