从直肠癌石蜡包埋组织中提取DNA的方法

摘要

本发明公开了一种从直肠癌石蜡包埋组织中提取DNA的方法，该方法包括脱蜡，消化和抽提和沉淀三个步骤，该提取方法只通过较少的步骤即可获得足够纯度和数量的DNA，可有效用于PCR扩增和DNA测序。该方法不仅易于操作，适合大规模生产，且制备的DNA体性质稳定、纯度高，对诊断直肠癌极具应用价值,为直肠癌石蜡包埋组织中DNA的制备提供了新的思路。

主权项

从直肠癌石蜡包埋组织中提取DNA的方法，其特征是包括如下步骤：①脱蜡：将待处理的石蜡包埋组织切成厚度为5‑10μm的组织片，取3片组织片置于无菌的1.5ml离心管内，加入125‑250μL pH为8.0‑8.5的提取缓冲液，用胶带密封后，置于微波炉中高火加热1‑2min，取出后迅速离心，离心速度为14000‑20000r/min，离心时间为8‑12min，取出置‑20℃条件下冷却直至水相和蜡层有机相出现分层，使离心管中上层蜡片充分硬化，倾斜离心管，用灭菌注射器将底部含有DNA的组织混合溶液吸出，得样品A；②消化和抽提：将步骤①所得样品中A转至新收集管，加入占样品A1倍体积的裂解缓冲液，56‑60℃水浴恒定温加热30min‑3h，加热期间分次或一次性添加20mg/mL蛋白酶K溶液5‑10μL，加热期间摇床定时震荡30min/次，煮沸8‑15min灭活蛋白酶K，然后离心，离心速度为14000‑20000r/min，离心时间为8‑12min，得上清液B；③沉淀：将步骤②所得的上清液B转移到另一Eppendorf管，加入1/10体积的3mol/L醋酸钠和2倍体积冰冷无水乙醇，混匀，‑20℃放置20分钟左右，DNA形成絮状沉淀，用玻棒捞出DNA沉淀，用70％冷乙醇洗DNA沉淀，三次，除去液体，真空抽或者室温干燥，将分离纯化的DNA溶解于TE缓冲液，溶解后的DNA于4℃保存。