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一种生物酶法制备肝素钠的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将猪肺清洗，去除内外污物和脂肪后，绞碎成糜状，并在充分搅拌下，加入水搅拌得到猪肺混合液，其中猪肺和水的质量比为1∶1‑2；S2、向猪肺混合液中加入0.2‑0.5mol/L的氢氧化钠溶液使pH达到8‑9，加入以猪肺混合液为基准0.8‑1.0wt％猪胰中提取的胰蛋白酶，在室温下以85‑95rpm的搅拌速度搅拌70‑75min得到一次酶解混合液，然后将一次酶解混合液以2‑3℃/min的升温速率升至35‑39℃并以30‑40rpm的搅拌速度搅拌240‑300min得到二次酶解混合液，在搅拌过程中维持液体pH值为7.0‑8.5；S3、将二次酶解混合液以1‑2℃/min的升温速率升至61‑65℃并以30‑40rpm的搅拌速度搅拌150‑180min得到三次酶解混合液，在搅拌过程中维持液体pH值为8.2‑8.7；S4、向三次酶解混合液加入0.1‑0.2mol/L的盐酸，使液体pH值为4.3‑5.4，将温度升至82‑84℃并以70‑80rpm的搅拌速度搅拌7‑12min，再加入以三次酶解混合液为基准2‑4wt％硫酸钠晶体后，维持温度为84‑85℃并以65‑75rpm的搅拌速度搅拌10‑15min得到酶失活混合液；S5、将酶失活混合液在75‑80℃时进行一次过滤得到一次滤液，待一次滤液冷却至36℃时，用0.2‑0.5mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为9‑10进行二次过滤后，再滴加0.1‑0.2mol/L的盐酸使pH值为8.2‑8.7得到二次滤液；S6、将二次滤液冷却至室温，以50‑60rpm的搅拌速度搅拌5‑10min后静置30‑40min以进行分层，吸取分层后的下层溶液，将下层溶液升温至55‑65℃，加入以下层溶液为基准3.5‑4wt％ D217树脂，以45‑50rpm的搅拌速度搅拌3‑3.6h后静置1‑2h得到含吸附肝素钠成分D217树脂混合液；S7、将含吸附肝素钠成分D217树脂混合液过滤后得到吸附肝素钠成分的D217树脂，将吸附肝素钠成分的D217树脂充分清洗后，用以吸附肝素钠成分的D217树脂为基准120‑140wt％硫酸钠溶液进行一次洗脱得到一次洗脱液，硫酸钠溶液的浓度为0.9‑1.1mol/L，洗脱时间为4‑6h，再以吸附肝素钠成分的D217树脂为基准40‑50wt％硫酸钠溶液进行二次洗脱得到二次洗脱液，硫酸钠溶液的浓度为0.9‑1.1mol/L，洗脱时间为1‑2h，将一次洗脱液和二次洗脱液混合，用0.02‑0.05mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值为9.5‑9.7，以20‑25rpm的搅拌速度搅拌2‑4h后静置5‑6h，分层后吸取上层溶液得到物料A；S8、向物料A中滴加0.1‑0.2mol/L的盐酸使pH值为6.0‑6.5，加入以物料A为基准120‑130wt％乙醇搅拌20‑30min，乙醇体积百分比为95％，静置7‑8h进行分层，再次吸取上层溶液，真空烘干得到物料B；S9、将物料B用浓度为0.2‑0.4mol/L的硫酸钠溶液完全溶解，加入0.5‑0.7mol/L氢氧化钠溶液调节pH至10.5‑11.5，加入以物料B为基准0.1‑0.2wt％双氧水，将温度维持在24‑26℃10‑15h，过滤后加入0.5‑0.7mol/L氢氧化钠溶液调节pH至10.5‑11.5，以30‑40rpm的搅拌速度搅拌0.5‑0.6h后加入以物料B为基准0.2‑0.3wt％双氧水，将温度维持在23‑24℃，保温14‑15h，过滤后滴加0.03‑0.07mol/L的盐酸调节pH为6.7‑7.2，得到二次氧化液，其中双氧水浓度为3‑4％；S10、向二次氧化液加入以二次氧化液为基准180‑200wt％，乙醇的体积百分比为35％，在3‑4℃沉淀36‑40h，过滤后收集一次过滤物，加入以二次氧化液为基准0.2‑0.5wt％硫酸钠溶液溶解，硫酸钠溶液的浓度为8‑10％，再加入以二次氧化液为基准120‑150wt％乙醇进行沉淀，乙醇的体积百分比为95％，过滤后收集二次过滤物，过滤物脱水、研细后，在35‑45℃下真空烘干，即得肝素钠精品。 |
