人肺癌耐百草枯细胞株的建立方法及应用

摘要

本发明采用人肺癌细胞株A549为诱导对象，采用周期暴露、逐步递增百草枯浓度的体外诱导方法，建立了耐百草枯细胞株A549/PQ。该细胞株已经于2015年6月16日保藏于微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.10892。本发明的细胞株具有典型的耐百草枯特性，这一生物学特性可为进一步研究逆转百草枯毒性途径、提取百草枯中毒评价标志物、发掘抗氧化新途径等提供了研究模型，具有较高的科研和生产应用价值。

主权项

一种人肺癌耐百草枯细胞株的建立方法，具体步骤如下：(1)人肺癌细胞株A549细胞置于培养液(含10％胎牛血清的RPMI‑1640培养基)，37℃，5％CO₂条件下常规培养。(2)取步骤(1)对数生长期的细胞用于实验，采用浓度递增、周期暴露的百草枯诱导法建立细胞耐药株，百草枯在培养基中的浓度首先从100μmol/L开始，加药24h后换液去除药物，待细胞重新生长至对数期后再次加入相同浓度百草枯刺激，如此重复3次，然后延长暴露时间至48h(即100μmol/L的百草枯暴露48h)，换液，除去药物，待细胞重新生长至对数期后，再次给予相同药物相同时间的暴露，如次重复3次。随后再增加百草枯浓度，每个浓度下诱导的方案一致，递增百草枯浓度梯度依次为100、200、400、600、800μmol/L，连续培养11个月，获得A549耐百草枯细胞株，人肺癌耐百草枯细胞株。