一种维生素B12的测定方法

摘要

本发明公开一种维生素B12的测定方法，样品前处理采用冷冻干燥粉碎，然后再通过维生素B12富集的方法，使维生素B12在低含量的软糖中可检出，而且检出结果准确，检测手段为高效液相色谱与质谱联用。与现有技术相比，本发明的维生素B12的测定方法，可以解决维生素B12在软糖中难富集和准确测定含量的问题，同时可以简化维生素B12利用生物法的间接含量测定方法，简化维生素B12低添加量下的糖果产品含量测定和质量控制方法。

主权项

一种维生素B12的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：1)、取冷冻至硬的含有维生素B12的软糖或营养糖果，粉碎；2)、取粉碎后的样品加热溶解提取，提取液待用；3)、取固相萃取柱，加醇类活化，再用水进行平衡，取步骤2的提取液加到固相萃取柱上，上样后，用水进行淋洗，完毕后负压抽干，再加入醇类洗脱，洗脱液收集到比色管内，水浴氮吹干，然后加入1mL水漩涡溶解，过滤膜过滤后待上机测定；4)、进行液相色谱分析，液相色谱的条件如下：色谱柱：菲罗门Kinetex HILIC，100mm×4.6mm ID 2.6um；流动相：乙腈+10mM乙酸铵溶液+乙酸，其中，乙腈体积为50mL，10mM乙酸铵溶液体积为49.8mL，乙酸体积为0.2mL；流速：0.4‑0.8mL/min；进样量：2‑4uL；柱温：25‑40℃；5)、进行质谱分析，质谱条件为：离子源：ESI；扫描方式：ESI+；检测方式：MRM；裂解电压：100‑200V；雾化器压力：45psi；加热辅助气流速：8‑15L/min；辅助气温度：200‑400℃；定性、定量离子对，碰撞气能量和去簇电压见下表：6)、吸取2‑4ul标准溶液和试样溶液注入高效液相串联质谱仪中，以保留时间和质荷比定性，峰面积定量，用标准曲线法进行测定；7)、维生素B12含量$X=\frac{(C_1-C_0)\times 1mL\times V_1}{m\times V_2\times {10}^3}\times 100$其中：C1——由标准曲线求得试样溶液中维生素B12的浓度，单位ng/mL；C0——空白试剂维生素B12的浓度，单位ng/mL；V1——样品定量体积，单位mL；V2——试样溶液上样体积，单位mL；m——样品取样量，单位g。