一种基因芯片的金沉积检测方法

摘要

本发明提供一种基因芯片的金沉积检测方法，其特征在于所述方法包括将已知的DNA序列点样到微阵列上制备基因芯片，在待测核酸的5’端预先修饰一种生物大分子，以及在纳米金上标记与待测核酸上修饰分子匹配的另一生物大分子构建纳米金复合探针，然后将修饰好的待测核酸和标记好的所述纳米金复合探针与所述基因芯片混合，孵育，洗去未反应的所述纳米金复合探针，加入双氧水金增强反应液观察。本发明提供的基因芯片的金沉积检测方法最大的特点及优点为：灵敏度高，检测方便，操作简便，耗时短，成本低，目视化检测，检测及信号读取设备依赖程度低。

主权项

一种基因芯片的金沉积检测方法，所述的方法包括将已知的DNA序列点样到微阵列上制备基因芯片，在待测核酸的5’端预先修饰一种生物大分子，以及在纳米金上标记与待测核酸上修饰分子匹配的另一生物大分子构建纳米金复合探针，然后将修饰好的待测核酸和标记好的所述纳米金复合探针与所述基因芯片混合，孵育，洗去未反应的所述纳米金复合探针，加入双氧水金增强反应液观察，其特征在于，具体的检测步骤为：①采用芯片点样仪将5’端氨基修饰的DNA探针点阵于醛基化修饰芯片表面制备基因芯片，置于密闭空间固定，所述DNA探针序列为：分枝杆菌通用探针：5’‑NH₂‑ggactgagatacggcc‑3’；结核分枝杆菌探针：5’‑NH₂‑cacgggatgcatgtct‑3’；龟分枝杆菌探针：5’‑NH₂‑ccacacacttcatggtga‑3’；胞内分枝杆菌探针：5’‑NH₂‑gacctttaggcgcatg‑3’；②PCR扩增获得标记有生物素的DNA分子，其中，引物的序列为：16s1：5’‑Biotin‑gataagcytgggaaactg‑3’,其中y代表c/t；16s2：5’‑Biotin‑tgcctcccgtaggagtctgg‑3’；③通过K₂CO₃将纳米金溶液调pH值至6，加入链亲和素溶液，混匀，再加入聚乙二醇溶液，离心，洗去未标记上的链亲和素，制得标记有链亲合素的纳米金复合探针；④取所述步骤②中制备的经过标记的DNA分子，滴于所述步骤①中制备的基因芯片的点样区，杂交，洗去未杂交的DNA分子，然后将所述步骤③中制备的标记好的纳米金复合探针滴于芯片点样区，反应30～60min，洗液清洗去除未反应的纳米金复合探针；⑤将双氧水金增强反应液滴在点阵区，室温静置，肉眼或显微镜下观察；所述的双氧水金增强反应液的组成为次氯金酸1～100mM、双氧水0.5～4M和质量百分数为1～10％的明胶。