一种甘露聚糖酶及生产方法

摘要

本发明公开了一种适应于碱性环境、热稳定性好的甘露聚糖酶生产方法，其特征是它包括菌种培养、摇瓶发酵、酶液制备步骤，所述菌种即枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），实验室编号为PARK9639，保藏号：CGMCC NO：6226，所述甘露聚糖酶为碱性酶，不产纤维素酶，对结晶纤维素、羧甲基纤维素均没有活性，在pH5.5～10.0、温度40℃～60℃范围内甘露聚糖酶活性稳定；本发明酶活力高，标准甘露聚糖酶液≥4500u/ml，单位生产成本低，发酵周期短，工业化程度高，工艺过程简单易控；产品不含纤维素酶活性，适合在造纸行业应用，可降低造纸生产成本和环境污染，同时有助提高纸的产品品质。

主权项

一种甘露聚糖酶的生产方法，其特征是它包括菌种培养、摇瓶发酵、酶液制备步骤，所述菌种即枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），实验室编号为PARK9639，保藏号：CGMCC NO：6226，其生物学特性为：革兰氏染色阳性菌，产芽孢，菌体呈杆状，单个细胞 0.7～0.8×2～3微米，周生鞭毛，能运动，以二分裂方式增殖；芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米椭圆位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大，在斜面培养基上菌落呈圆形，污白色、着色均匀，边缘整齐，无光泽，黏稠；所述的菌种培养为CGMCC NO：6226菌种在配制的斜面上生长良好，斜面培养基配方为：1000mL蒸馏水中，加入牛肉膏3g～8g，酵母膏3g～8g ，蛋白胨8g～12g，葡萄糖3g～5g ，氯化钠3g～5g，调pH值6.9～7.1，0.1MPa灭菌28分钟～32分钟，制成试管斜面，接种该菌种，34℃～36℃，培养20小时～24小时后，放入5℃冰箱中备用，或向菌斜面上注入已灭菌液体石蜡后保藏或以脱脂牛奶为载体冷冻干燥真空封口保藏；所述的摇瓶发酵为CGMCC NO：6226菌种在规定的培养条件下可产生高活力的甘露聚糖酶，这种培养条件是：以质量计，培养基配方为：魔芋粉3﹪～4﹪、麦麸2﹪～4﹪、氮含量40％的玉米浆0.5﹪～1﹪、酵母膏0.5﹪～1﹪，磷酸氢二铵0.2﹪～0.3﹪、磷酸氢二钾0.02﹪～0.05﹪、蛋白胨0.1﹪～0.2﹪、硫酸镁0.02﹪～0.05﹪、碳酸钠0.20﹪～0.25﹪、水89.15﹪～93.46﹪，各组分之和为100﹪，灭菌前，调pH值为pH8.0～pH8.5，0.1MPa灭菌30分钟～35分钟，培养条件：32℃～37℃，摇床转速260 r/min ～280r/min，培养34小时～42小时；所述的酶液制备为由茄瓶斜面制得细胞液体种子到种子罐，再到产酶发酵罐，二级发酵，制备标准化酶液。