一种快速制备甜叶菊叶片原生质体的方法

摘要

本发明涉及一种快速制备甜叶菊叶片原生质体的方法。以甜叶菊组培苗幼嫩叶片为材料，通过控制质壁分离时间、纤维素酶Onozuka R-10、半纤维素酶Hemicellulase、离析酶Macerozyme R-10的配比及浓度、酶解液中甘露醇浓度、酶解液pH、酶解时间等因素，筛选出分离甜叶菊叶片原生质体最适合的条件。本发明所述方法获得的游离原生质体数量较多，活性较高，是一种简便、快捷制备甜叶菊叶片原生质体的方法。

主权项

一种快速制备甜叶菊叶片原生质体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：（1）样品筛选：取甜叶菊组培苗的幼嫩叶片；（2）将选取的幼嫩叶片用刀片切成0.5‑1 mm的细条，置于盛有质壁分离液（CPW+13% Mannitol）的培养皿中进行质壁分离处理；（3）将经过质壁分离处理的叶条转移至盛有酶解液的培养皿中，置于摇床上（50rpm）黑暗条件下进行酶解，当溶液转为绿色后，将溶液制片于显微镜下观察，视野下会出现大量圆形的原生质体。