一种质粒DNA的制备方法

摘要

一种质粒DNA的制备方法属于DNA的制备方法技术领域，尤其涉及一种质粒DNA的制备方法。本发明提供一种纯度高的质粒DNA的制备方法。本发明包括以下步骤。1)挑取含有质粒的单菌落接种到具有相应抗性的LB培养基中,振荡培养过夜.取过夜培养的菌液,接种到具有相应抗性的LB培养基中,振荡培养；2)转移菌液至离心瓶中,离心,去上清；3)将细菌沉淀重悬溶液Ⅰ中，剧烈振荡，使菌体分散混匀；4）加溶液Ⅱ，将离心瓶温和颠倒数次混匀，并将离心瓶放置于冰上，使细菌裂解；5）加入预冷的溶液Ⅲ，将离心瓶温和颠倒数次混匀，在冰上放置；离心10min。

主权项

一种质粒DNA的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)挑取含有质粒的单菌落接种到具有相应抗性的LB培养基中,振荡培养过夜.取过夜培养的菌液, 接种到具有相应抗性的LB培养基中,振荡培养；2)转移菌液至离心瓶中,离心,去上清；3)将细菌沉淀重悬溶液Ⅰ中，剧烈振荡，使菌体分散混匀；4）加溶液Ⅱ，将离心瓶温和颠倒数次混匀，并将离心瓶放置于冰上，使细菌裂解；5）加入预冷的溶液Ⅲ，将离心瓶温和颠倒数次混匀，在冰上放置；离心10min；6）将上清倾到进离心管中，加入异丙醇混匀，离心，去尽上清；7）将沉淀溶于lTE，然后将溶液转移到离心管，加入NH4Ac, 颠倒数次混匀,在冰上放置,离心；8)将上清均分进二个离心管,然后各加入异丙醇混匀，放置，离心，去尽上清；9)二个离心管各加入lTE溶解沉淀，然后将溶液合并到一个离心管中,水浴以降解RNA分子；10)加入的PEG8000+1.6mol/L NaCl,颠倒数次混匀,在冰上放置, 然后离心, 去尽上清；11)将沉淀完全溶于TE,加入NH4Ac混匀，然后加入异丙醇, 颠倒数次混匀, 在冰上放置,离心，去尽上清；12)加入乙醇洗涤沉淀和离心管内壁,吸去乙醇,进行短暂的离心,然后尽量吸走剩余的乙醇.将离心管开盖室温放置,使沉淀表面的乙醇挥发.最后视沉淀多少加入TE溶解沉淀。