苦碟子注射液糖类成分的含量测定方法

摘要

本发明涉及一种中药注射液的鉴别方法，特别是涉及一种利用GC-MS测定苦碟子注射液糖类成分的测定方法。其步骤如下：（a）样品的制备，样品前处理方法。（b）标准品的制备，醛糖类成分衍生化方法，酮糖类成分衍生化方法。(c)色谱条件气质分析仪，GC-MS-QP2010SE毛细管柱。(d)测定分别精密吸取标准品与样品，注入气相色谱仪，用气相色谱法测定，制定苦碟子注射液糖类成分指纹图谱。本方法采用衍生化法使苦碟子中难以检测的糖类成分更加准确的检测出来。

主权项

一种苦碟子注射液糖类成分的含量测定方法，其特征在于步骤如下：（a）样品的制备样品前处理方法：取苦碟子注射液过HyperSep C18柱后，置于具塞圆底烧瓶中，1M  HCl调pH为1，减压抽真空后70℃水浴3h，冷却后加入10% NaOH 调pH至中性，精密量取每5ml于每支离心管中，冷冻干燥备用；称取上述干燥物置于10 ml 具塞试管中，加入100 mg 盐酸羟胺和500μl吡啶，在90℃水浴中振荡反应30min，取出冷至室温，加入500μl乙酸酐，于90℃水浴中继续进行乙酰化反应30min，冷却后即得衍生物；称取冷冻干燥物2mg定溶于10ml容量瓶中，然后稀释到0.04mg/ml和0.5mg/ml，精密移取1ml，冷冻干燥，加入0.6ml吡啶、100mg盐酸羟胺，混匀，放入90℃水浴中加热反应30 min，取出后冷却至室温，加入0.3ml六甲基二硅胺，在90℃下继续反应30min 加入0.1ml三甲基氯硅烷，10000r/min离心15min，取上清液直接进样分析；（b）标准品的制备醛糖类成分衍生化方法：分别称取市面上购买的阿洛糖、肌醇、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖标准品置于10 ml 具塞试管中，加入100 mg 盐酸羟胺和500μl吡啶，在90℃水浴中振荡反应30min，取出冷至室温，加入500μl乙酸酐，于90℃水浴中继续进行乙酰化反应30min，冷却后即得衍生物；酮糖类成分衍生化方法：分别称取果糖标准品2mg定溶于10ml容量瓶中，然后稀释到0.04mg/ml和0.5mg/ml，精密移取1ml，冷冻干燥，加入0.6ml吡啶、100mg盐酸羟胺，混匀，放入90℃水浴中加热反应30 min，取出后冷却至室温，加入0.3ml六甲基二硅胺，在90℃下继续反应30min 加入0.1ml三甲基氯硅烷，10000r/min离心15min，取上清液直接进样分析；(c)色谱条件气质分析仪：GC‑MS‑QP2010SE毛细管柱：Rtx‑5 MS 0.25 mm×30 m，0.25 μm；载气：高纯氦气He，99.999%；进样口温度：280℃；柱流速：1.0mv/min；进样量：1μl；分流比：30:1；气化室温度：280℃；柱前压73.0kPa气‑质接口温度：270℃；离子源：EI源；离子源温度200℃；电子能量：70ev；溶剂延迟时间5min，质量扫描范围45－550amu；(d)测定分别精密吸取标准品与样品，注入气相色谱仪，用气相色谱法测定，制定苦碟子注射液糖类成分指纹图谱。