一种用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒及方法

摘要

本发明涉及一种用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒及方法，所述方法包括如下步骤：(1)引物和探针的设计合成；(2)、PCR反应组分，(3)、PCR扩增；(4)、熔解曲线分析。本发明利用荧光PCR和熔解曲线分析技术平台，创新性地应用带有核酸修饰的新型双标记和双特异性的探针检测临床常见12种分枝杆菌菌种，实现了各菌种间至少在一个检测通道中的Tm值之差大于等于4℃，可以准确有效的鉴定两种或多种菌同时存在的复合菌。

主权项

一种用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒，其中鉴别试剂包括三对引物和五条探针，所述引物包括上游引物primer1、下游引物primer2、上游引物primer3、下游引物primer4、上游引物primer5和下游引物primer6；引物primer1、primer2、primer3、primer4、primer5和primer6的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11所示；所述探针包括3个区域：与所述靶核酸序列互补的5’端单链靶核酸序列结合部位作为第1区域；与所述靶核酸序列互补的3’端单链靶核酸序列结合部位作为第2区域；与所述5’端和所述3’端结合部位相连接的非结合突起部位作为第3区域；所述五条探针分别为Probe1、Probe2、Probe3、Probe4和Probe5；其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示。