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一种检测Anti‑IgG浓度的方法，其特征在于具体步骤为：(1)制备3,5‑二溴水杨醛席夫碱镍配合物‑氧化石墨烯电化学免疫传感器a.取10毫克氧化石墨烯和0.05毫摩尔3,5‑二溴水杨醛席夫碱镍配合物溶于DMF即N,N‑二甲基甲酰胺中，超声分散2小时制得3,5‑二溴水杨醛席夫碱镍配合物‑氧化石墨烯悬浮液；b.将金电极在放有Al<sub>2</sub>O<sub>3</sub>粉末的麂皮上抛光后用二次水淋洗，再依次在无水乙醇和二次水中分别超声清洗3分钟，红外烘干，然后在金电极上滴加步骤(1)第a步制得的3,5‑二溴水杨醛席夫碱镍配合物‑氧化石墨烯悬浮液，经红外烘干，制得3,5‑二溴水杨醛席夫碱镍配合物‑氧化石墨烯修饰金电极，记为L1电极；c.滴加10微升浓度为 1.0毫克/毫升的EDAC即1‑（3‑二甲氨基丙烷）‑3‑乙基碳二亚胺与NHS即N‑羟基琥珀酰亚胺的混合溶液到步骤(1)第b步制得的L1电极上，水平放置2小时，得到活化的3,5‑二溴水杨醛席夫碱镍配合物‑氧化石墨烯修饰金电极，记为L2电极，置于4℃的冰箱中保存待用；d.用10微升浓度为1.0毫克/毫升的h‑IgG溶液滴涂在步骤(1)第c步制得的L2电极上，制得固定了h‑IgG的3,5‑二溴水杨醛席夫碱镍配合物‑氧化石墨烯修饰金电极，记为L3电极，置于4℃的冰箱中保存待用；e.在步骤(1)第d步制得的L3电极表面滴加10微升浓度为1毫克/毫升的 BSA即牛血清白蛋白溶液，对L3电极表面的活性位点进行封闭，红外烘干，记为L4电极，置于4℃的冰箱中保存待用，L4电极即为3,5‑二溴水杨醛席夫碱镍配合物‑氧化石墨烯电化学免疫传感器；(2)取5只步骤(1)制得的3,5‑二溴水杨醛席夫碱镍配合物‑氧化石墨烯电化学免疫传感器，在室温下，分别滴涂不同浓度的Anti‑IgG进行特异性结合，所滴涂的Anti‑IgG的质量与固定在3,5‑二溴水杨醛席夫碱镍配合物‑氧化石墨烯电化学免疫传感器上的h‑IgG质量比为0~1:1，用二次水洗涤晾干备用；(3)以步骤(2)处理过的传感器为工作电极，并以饱和甘汞电极为参比电极、铂金电极为辅助电极，在pH 值为6.0的PBS 缓冲溶液中进行循环伏安扫描，记录不同浓度Anti‑IgG的循环伏安图中对应的还原峰电流，结果表明Anti‑IgG浓度在0.01~260微克/升的范围内，还原峰电流与Anti‑IgG浓度具有良好的线性关系，随着Anti‑IgG浓度增加，电流逐渐减小，以Anti‑IgG浓度为横坐标，以还原峰电流为纵坐标，绘制工作曲线，其线性回归方程为y（µA）=154.3‑0.353c(µg/L)，R=0.993，检出限为0.006µg/L即S/N=3；(4)另取一定量的待测溶液，用步骤(3)中的方法测定还原峰电流，再根据步骤(3)所得的线性回归方程计算待测溶液中Anti‑IgG的浓度。 |
