用于检测等位变体的组合物和方法

摘要

本发明提供了用于区分不同等位基因之间序列变异的组合物、方法和试剂盒。更具体地，在一些实施方案中，本发明提供了以高灵敏度和/或特异性确定稀有(例如，突变)等位变体(如单核苷酸多态性(SNP)或核苷酸插入或缺失)在包含丰富(例如，野生型)等位变体的样品中的存在和/或水平(例如，定量)的组合物、方法和试剂盒。由此，在某些实施方案中，本发明提供了用于例如与非常低水平的突变等位基因相比，在含有丰富水平的野生型等位基因的样品中检测体细胞突变的高度选择性方法。

主权项

反应混合物，其包含：(a)核酸分子；(b)等位基因特异性引物，其中等位基因特异性引物的等位基因特异性核苷酸部分与靶序列的第一等位变体互补，并且其中等位基因特异性引物包含至少一个核酸修饰；(c)与包含第二等位变体的靶序列区域互补的等位基因特异性阻断探针，其中等位基因特异性阻断探针包含不可延伸性3'‑己二醇阻断部分和至少一个核酸修饰；(d)检测探针；和(e)与靶序列的区域互补的基因座特异性引物，其中与基因座特异性引物互补的靶序列的区域是第一等位变体的3’并在相反链上。