| 发明名称 | 一种高效制备食品级酸性脲酶的方法及应用 | ||
| 摘要 | 本发明公开了一种高效制备食品级酸性脲酶的方法及其应用，属于生物工程技术领域。利用食品级乳酸乳球菌表达系统成功实现了酸性脲酶的高效表达制备方法及应用，酸性脲酶酶活达到10200U/L，纯化后酸性脲酶比酶活为325.6U/mg。纯化后的酶对氨基甲酸乙酯底物的比酶活达到243.4U/mg，在黄酒中加入本发明制备的酸性脲酶可高效降解尿素(2天降解率100%)和氨基甲酸乙酯（3天降解率72%）。本发明制备的重组酸性脲酶可以用于发酵食品中尿素和氨基甲酸乙酯的消除，可高效解决发酵食品中氨基甲酸乙酯的残留问题，本发明为实现食品级酸性脲酶的工业化生产奠定了基础。 | ||
| 申请公布号 | CN103571815B | 申请公布日期 | 2016.03.02 |
| 申请号 | CN201310524588.6 | 申请日期 | 2013.10.29 |
| 申请人 | 江南大学 | 发明人 | 陈坚;堵国成;康振;杨宇清 |
| 分类号 | C12N9/80(2006.01)I;C12N15/55(2006.01)I;C12N15/74(2006.01)I;C12H1/15(2006.01)I;A23L5/20(2016.01)I | 主分类号 | C12N9/80(2006.01)I |
| 代理机构 | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人 | 何自刚;王玉松 |
| 主权项 | 一种高效制备食品级酸性脲酶的方法，其特征在于，从罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)基因组上克隆获得酸性脲酶基因，将重组质粒导入乳酸乳球菌中，构建高效表达酸性脲酶的重组菌，利用重组菌发酵生产脲酶；所述方法中酸性脲酶基因簇的表达在乳酸乳球菌中受Nisin启动子调控，制备步骤如下：1)根据NCBI公布的罗伊氏乳杆菌酸性脲酶基因序列GenBank:AAPZ02000001.1，GI:194454092‑194454098，从罗伊氏乳杆菌基因组上克隆获得酸性脲酶基因，目的基因连接载体得到ureLR基因的重组质粒；2)将含有ureLR基因的重组质粒与质粒pNZ8148或pNZ8149酶切、连接构建重组质粒；3)将步骤2)构建的重组质粒导入乳酸乳球菌NZ9000或NZ3900构建产脲酶重组乳酸乳球菌NZ9000(pNZ8148‑ureLR)或NZ3900(pNZ8149‑ureLR)，脲酶基因簇的表达在乳酸乳球菌中受Nisin启动子调控；4)利用重组乳酸乳球菌NZ9000(pNZ8148‑ureLR)或NZ3900(pNZ8149‑ureLR)发酵生产脲酶； | ||
| 地址 | 214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号 | ||