对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂及检测方法

摘要

本发明涉及一种对虾桃拉综合症病毒可视化环介导等温扩增检测试剂及检测方法，针对对虾桃拉综合征病毒基因组保守区的衣壳蛋白基因序列，设计6条特异性扩增引物，扩增引物和反应试剂共同组成LAMP检测液体系，反应试剂包括反应缓冲液Bst DNA polymerase bufferr、链置换DNA聚合酶、镁离子、二价锰离子、甜菜碱、脱氧核糖核苷三磷酸dNTPs、颜色指示剂，余量为水。检测步骤包括：提取待检样品的基因组DNA、配制LAMP检测液体系、反应体系、恒温设备中扩增反应、判断检测结果。本发明的检测方法在敏感性高、特异性强的前提下使用的仪器简单，成本低。

主权项

对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂，其特征在于：针对对虾桃拉综合征病毒基因组保守区的衣壳蛋白基因序列，设计6条特异性扩增引物，其中包括两条外引物F3和B3、两条内引物FIP和BIP、两条环引物LF和LB，所述的F3为5'‑ GGTCCTGGACTTCAAACA ‑3'，所述的B3为5'‑TTGCGTGGTGGGACTA‑3'，所述的FIP为5'‑AGGTTCCACAATCTTGATGAATGAT‑CTGTTACATTCTTAGACAGCACTA‑3'，所述的BIP为5'‑TCACTGTTAGTAACACTACCTCCT‑CCTGCTAACCCAGTCGA‑3'，所述的LF为5'‑ATCCCAATCACTAATCAGAATG‑3'，所述的LB为5'‑AGTCCTCCACTGGTTGT‑3'；所述的对虾桃拉综合症病毒可视化LAMP检测试剂，所述的扩增引物加入反应试剂后共同组成LAMP检测液体系，所述的反应试剂包括反应缓冲液Bst DNA polymerase bufferr、链置换DNA聚合酶、镁离子、二价锰离子、甜菜碱、脱氧核糖核苷三磷酸dNTPs、颜色指示剂，水；所述的颜色指示剂为钙黄绿素，或是SYBR Green；所述的LAMP检测液体系中的各组分浓度分别为：F3 0.2μmol/L～8μmol/L，B3 0.2μmol/L ～8μmol/L，FIP 0.2μmol/L～8μmol/L，BIP 0.2μmol/L～8μmol/L，LF 0.2μmol/L～8μmol/L，LB 0.2μmol/L～8μmol/L，反应缓冲液Bst DNA polymerase buffer 1×、链置换DNA聚合酶 4U～40U、镁离子0.8 mmol/L～10 mmol/L、二价锰离子0.02～1.25 mmol/L、甜菜碱0.04 mmol/L～1 mmol/L、脱氧核糖核苷三磷酸dNTPs 0.2 mmol/L～4mmol/L、钙黄绿素25μmol/L～125μmol/L，或1×～10×SYBR Green代替钙黄绿素25μmol/L～125μmol/L。