一种利用仿刺参加工液提取抗菌多肽的方法

摘要

本发明公开了一种利用仿刺参加工液提取抗菌多肽的方法。其是以仿刺参加工液为原料，通过电渗透脱盐、真空干燥，得浓缩液；酶解浓缩液，离心取酶解上清液，将酶解上清液真空浓缩、冷冻干燥后，得固体粉末；将固体粉末复溶于去离子水，乙醇沉淀多糖，取沉淀后的溶解液采用凝胶过滤层析法，收集各吸收峰洗脱液，洗脱液进行抑菌活性测后，将测得具有抑菌活性的吸收峰洗脱液合并，冷冻干燥，得复合抗菌多肽。本发明提供的提取抗菌多肽的方法工艺合理、操作可行，按照该方法所提取的抑菌多肽来源可靠，安全性高，后期研究方便。

主权项

一种利用仿刺参加工液提取抗菌多肽的方法，其特征在于：其经过下列工艺步骤：（1）原材料选取与处理选取仿刺参加工液为原料，将其迅速冷却至4～10℃，管式离心，去除仿刺参加工液中的不溶物，得上清液；（2）脱盐将步骤（1）中得到的上清液通过电渗析进行脱盐处理，得脱盐液；（3）真空浓缩将步骤（2）中得到的脱盐液进行真空浓缩至原溶液体积的1/10～1/20，得浓缩液；（4）酶解将步骤（3）中得到的浓缩液中加入2～5% (以底物蛋白含量计，w/w%)海产品水解酶，调整溶液pH值至7.5～8.5，温度50～60℃，水解3～5 h；水解后加热至90～100℃，保持10～20min灭酶，得酶解液；将酶解液离心，得酶解上清液；（5）浓缩、干燥将步骤（4）中得到的酶解上清液进行真空浓缩至固形物含量在15～30%之间，冷冻干燥，制得固体粉末；（6）乙醇沉淀将步骤（5）得到的固体粉末重新溶解于去离子水中，加入无水乙醇至乙醇终浓度为70～90％，4℃沉淀1～2h，离心去除多糖沉淀，得沉淀后的溶解液；（7）超滤、冷冻干燥将步骤（6）中得到的沉淀后的溶解液采用截留分子量为5000Da的超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于5000 Da的截留液，进行冷冻干燥，得到仿刺参加工液蛋白酶解产物；（8）分离纯化将步骤（7）中得到的仿刺参加工液蛋白酶解产物用去离子水溶解成浓度为0.2～0.4g/mL溶液，采用Sephadex LH‑20凝胶色谱柱进行分离纯化，其中，流动相为蒸馏水，洗脱速度为0.5～0.8 mL/min，220 nm测定吸光度，收集各吸收峰洗脱液，备用；（9）抑菌活性测定、复合将步骤（8）中得到的各吸收峰洗脱液进行抑菌活性测定；将测得具有抑菌活性的吸收峰洗脱液合并，冷冻干燥，得复合抗菌多肽。