一株可以高效分泌纳豆激酶的地衣芽胞杆菌工程菌

摘要

一株可以高效分泌纳豆激酶的地衣芽胞杆菌工程菌，属于酶工程和微生物技术领域。本方法采用分子生物学技术，通过对外源蛋白转运过程中起重要作用的信号肽进行筛选和替换，在之前实验室保存的地衣芽胞杆菌产纳豆激酶工程菌BL10 (pP43SNT）的基础上，将其信号肽由来源于地衣芽胞杆菌WX-02中胞外丝氨酸蛋白酶Vpr的信号肽替换为来源于枯草芽胞杆菌168中果聚糖酶SacC的信号肽，重新构建了地衣芽胞杆菌产纳豆激酶工程菌Bl10（pP43SacCNK）。在液体发酵的条件下该菌可以显著提高纳豆激酶的分泌水平，最大酶活力可达33.83 FU/mL。该菌株于2014年6月16日保存于典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M2014253。

主权项

本发明通过对实验室保存菌株Bl10（pP43SNT）中纳豆激酶分泌型载体pP43SNT中的信号肽的筛选和替换，由来源于枯草芽胞杆菌168中的果聚糖酶SacC的信号肽替换了原始的来源于地衣芽胞杆菌WX‑02中胞外丝氨酸蛋白酶Vpr的信号肽，重新构建了纳豆激酶分泌型表达载体pP43SacCNK，重组质粒转化地衣芽胞杆菌Bl10后得到了地衣芽胞杆菌Bl10（pP43SacCNK），该菌在随后的液体发酵过程中纳豆激酶分泌量明显提高。