在无血清悬浮细胞培养系统中生产重组慢病毒载体的可扩大的制造方法

摘要

提供用于以满足人类基因治疗的预期需要的规模制备高纯度rLV载体制剂的方法。

主权项

一种用于大规模病毒载体纯化的方法，所述方法包括：a)从无血清悬浮培养基收获重组病毒载体，所述重组病毒载体包括转基因；b)通过过滤澄清步骤a)的收集物；c)收获步骤b)的滤液，并且可选地核酸酶酶切所述滤液，以去除DNA/RNA杂质；d)使步骤c)的滤液经过PEG调节的亲和层析或离子交换柱层析，从而分离所述病毒载体；e)通过切向流过滤进一步纯化从步骤d)获得的所述病毒载体，以减小体积和更换缓冲液；f)使步骤e)的滤液经过尺寸排阻柱层析，以进一步纯化所述病毒载体；g)使步骤f)的所述载体经切向流过滤，从而获得最终的载体滴度；以及h)通过过滤器过滤从步骤g)获得的载体溶液，以及i)收集所述纯化的病毒载体。