桃儿七中两个异戊烯基化双黄酮podoverine B和podoverine C的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及桃儿七中两个异戊烯基化双黄酮类化合物podoverine B和podoverine C的制备方法，可有效解决快速从桃儿七中制备两个异戊烯基化双黄酮类化合物的问题，方法是，将桃儿七粉碎成粗粉，用乙醇回流提取，乙醇提取液减压浓缩至无醇味，乙酸乙酯萃取，得桃儿七粗提取物；对桃儿七粗提取物经凝胶柱色谱初步分离，再高速逆流色谱纯化，即得两个异戊烯基化双黄酮类化合物podoverine B和podoverine C。本发明方法稳定可靠，效率高，时间短，产率高，可快速从桃儿七中分离得到两个异戊烯基化双黄酮类化合物，且纯度高，并经活性试验表明对前列腺癌细胞PC-3具有细胞毒活性，有效用于制备治疗前列腺癌的药物，经济和社会效益显著。

主权项

一种桃儿七中分离的两个异戊烯基化双黄酮类化合物podoverine B(1)和podoverine C(2)的制备方法，其特征是，分子结构式分别为：制备方法是：1)、粗提取物的制备：将桃儿七3‑6kg粉碎成过40目筛的粗粉，用桃儿七6‑12倍重量的体积浓度为95％的乙醇90‑95℃回流提取2‑4次，得乙醇提取液，每次1.5‑2小时，合并乙醇提取液，减压浓缩至无醇味，得浓缩物，加浓缩物重量7‑12倍的蒸馏水混悬，得混悬液，加入混悬液等体积的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯萃取层，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏，即为桃儿七粗提取物；2)、凝胶柱色谱初步分离：对桃儿七粗提取物经凝胶柱色谱初步分离，分别采用体积比为5︰5、6︰4的甲醇‑水系统进行梯度洗脱，流速为0.6‑1mL/min^‑1，每7‑10mL为1个流份，共收集50‑60个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，采用GF254薄层板，以体积比4‑6︰1的二氯甲烷‑甲醇作为展开剂，以体积比10︰90的硫酸‑乙醇溶液作为显色剂，100‑110℃加热3‑5min，根据薄层色谱检测结果合并含有目标成分podoverine B和podoverine C的流份，45℃减压回收溶剂，得到含有目标成分的浓缩物；3)、高速逆流色谱纯化：取体积比为3.5︰5︰3.5︰5的正己烷︰乙酸乙酯︰甲醇︰水，置于分液漏斗中，充分振摇均匀，静置10‑14小时，分别取上部液相和下部液相，取含有目标成分的浓缩物各100‑200mg，分别加入浓缩物20‑50倍重量的上部液相和下部液相中，超声溶解，得到含有目标成分的超声溶液，用高速逆流色谱仪进行纯化，方法是：另取上部液相为固定相、下部液相为流动相，固定相以2mL/min^‑1流速注满高速逆流色谱仪的螺旋管，然后转速调为750‑850r/min，同时流动相以2mL/min^‑1流速泵入螺旋管，待两相在高速逆流色谱仪的色谱柱中达到动态平衡后，由进样阀注入超声溶液，开启检测器和记录仪进行分离，超声溶液分离的检测波长为254nm，温度为25‑27℃，高速逆流色谱仪转速750‑850r/min，流动相流速2.0‑2.2mL/min^‑1，根据色谱图分别收集目标成分，减压回收溶剂至干，即得两个异戊烯基化双黄酮类化合物podoverine B和podoverine C。