| 摘要 |
1. Пептид для введения метки в химерный белок, который представляет собой пептид длиной от 7 до 36 аминокислот со следующей последовательностью:Link1Link0Xaa1Xaa2Xaa3Xaa4Xaa5Xaa6Asn,где Link1 - пептидный линкер, отделяющий N-конец пептида от С-конца остальной аминокислотной последовательности,где Link0 - пептидный линкер, такой как Gly, где n=0-10,где Xaa1 - гиброфобная аминокислота, такая как Met, Phe, Leu, Ile,где Xaa2 - аминокислота, такая как His, Trp, Tyr, Ser, Ala, Arg,где Xaa3 - аминокислота, такая как Cys, Leu, Thr,где Xaa4 - аминокислота, такая как Phe, Trp, Asp, Arg, Gln, Asn, His, Thr, Ser, Met, Val, Ile, Ala, Gly,где Xaa5 - аминокислота, такая как Thr, Ser, Met, Val, Ile, Leu, Ala, Asn,где Xaa6 - аминокислота, такая как Phe, Cys, Met, Gln, Ser, Ala,где Asn - C-концевая аминокислота аспарагин.2. Пептид по п. 1 отличающийся тем, чтоXaa1 - гиброфобная аминокислота, такая как Met,Xaa2 - аминокислота, такая как Arg,Xaa3 - аминокислота, такая как Thr,Xaa4 - аминокислота, такая как Gly,Xaa5 - аминокислота, такая как Asn,Xaa6 - аминокислота, такая как Ala,где Asn - C-концевая аминокислота аспарагин,где Link0 - пептидный линкер, такой как Gly, где n=4,и пептид имеет аминокислотный линкер Link1, такой как Asn-Asn-Asn-Asn-Asn-Asn-Asn-Asn-Asn-Leu-GlyIle-Glu-Gly-Arg-Ile-Ser-Glu-Phe.3. Способ для введения метки в химерный белок, заключающийся в том, что в полученный любым известным способом исследуемый химерный белок вводят с С-конца пептид, указанный в п. 1, используемый в качестве метки, после чего к C-концу такого химерного белка присоединяют аденозин-монофосфат с использованием фермента MccB, причем для получения аденилированного химерного белка in vivo вводят генетическую конструкцию, которая кодирует эти белки под индуцируемым промотером, а для получения аденилированного химерного белка in vitro смешивают химерный белок с ферментом MccB и АТФ, взятыми в количественном соотношении 4-250; 5мкмоль и 2,5-4 ммоль.4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что для введения метки аденозин-монофосфата в исследуемый химерный белок in vivo рекомбинантный ДНК-вектор вводят в бактериальные кле |
