一种犀角金线鲃心脏细胞系的构建方法

摘要

本发明涉及一种犀角金线鲃心脏细胞系的构建方法，该方法包括如下步骤：1)犀角金线鲃心脏组织的获取：采用青霉素和酒精联合对犀角金线鲃进行消毒；2)原代培养：采用含有谷氨酰胺、青霉素、链霉素、硫酸链霉素、两性霉素，渗透压为的280-330mOsm/l的M199培养液进行培养；3)传代培养：传至第10代时，细胞培养液换成基础培养液，所述犀角金线鲃心脏细胞系建立成功。本发明的构建方法所获得的犀角金线鲃心脏细胞系形态为成纤维样，能够连续传代并直接应用于生物学特性研究，不仅能满足对犀角金线鲃这一珍稀物种种质资源保存和理论研究的需要，同时也是洞穴鱼类的首个心脏细胞系，为细胞水平的洞穴适应性研究奠定了基础。

主权项

一种犀角金线鲃心脏细胞系的构建方法，该构建方法包括如下步骤：1)犀角金线鲃心脏的获取：先用50IU/l的青霉素浸泡消毒犀角金线鲃鱼体20‑30分钟，再用80‑120ppm的MS‑222麻醉犀角金线鲃；再以75％酒精擦拭鱼体后，取其心脏，加入PBS消毒液浸泡心脏组织；浸泡15‑30分钟后，将心脏组织用PBS消毒液清洗；2)原代培养：将通过1)获得的心脏组织剪成组织小块，并将其接种于25cm²细胞培养瓶中，在16‑20℃培养箱中倒置过夜，次日再加入原代培养液，在16‑20℃培养箱中启动原代培养，每三天半量更换培养液，第6‑8天细胞开始从组织块中迁移，30‑40天长成细胞单层；3)传代培养：原代心脏细胞铺满瓶底80％后开始传代，先吸出培养瓶中的原代培养液，以含0.1‑0.2％的胰蛋白酶的胰酶消化法传代悬起细胞，加入传代培养液1‑2ml以中和胰酶反应，首次传代按1:1传，此后按1:2进行传代，于16‑20℃培养箱中继续培养；每4‑6天传代一次，传至第10代时，细胞培养液换成基础培养液，所述犀角金线鲃心脏细胞系建立成功。