抗体的快速人源化

摘要

本发明提供了用于在哺乳动物细胞中产生人源化全长抗体的方法。提供了具有验证的高度框架多样性的人源化变体的文库，而不需要回复突变来保持初始亲和性。将源自模板抗体的合成CDR编码片段文库连接于来自人框架集合(pool)的人框架区编码片段，所述人框架集合仅限于来自功能表达抗体的种系序列。载体包含编码HC框架区4的核酸序列。不需要CDR移植或噬菌体展示。

主权项

一种生产人源化抗体的方法，所述方法包括：(a)合成包含互补决定区片段编码文库和框架片段编码文库的免疫球蛋白重链双链DNA片段文库，其中每个互补决定区片段文库源自模板抗体，并且每个框架片段文库源自从功能表达的人抗体获得的人框架集合；(b)合成包含互补决定区片段编码文库和框架片段编码文库的免疫球蛋白轻链双链DNA片段文库，其中每个互补决定区片段文库源自所述模板抗体，并且每个框架片段文库源自从功能表达的人抗体获得的人框架集合；(c)通过以框架1‑互补决定区1‑框架2‑互补决定区2‑框架3‑互补决定区3的顺序逐步液相连接来自所述框架片段编码文库的重链框架编码片段和来自所述互补决定区片段编码文库的重链互补决定区编码片段，由所述重链片段文库组装，以产生人源化重链可变结构域编码文库；(d)通过以框架1‑互补决定区1‑框架2‑互补决定区2‑框架3‑互补决定区3的顺序逐步液相连接来自所述框架片段编码文库的轻链框架编码片段和来自所述互补决定区片段编码文库的轻链互补决定区编码片段，由所述轻链片段文库组装，以产生人源化轻链可变结构域编码文库；(e)将组装的人源化重链可变结构域编码文库和组装的轻链可变结构域编码文库克隆至表达载体中，所述表达载体包含：编码重链框架区4的核苷酸序列，其源自功能表达的人抗体的人重链可变结构域，和编码轻链框架4的核苷酸序列，其源自功能表达的人抗体的人轻链可变结构域；以形成人源化文库；(f)将所述人源化文库转染至细胞中；(g)在所述细胞中表达人源化抗体，以形成人源化抗体文库；(h)筛选所述人源化抗体文库，以测定所述人源化抗体的表达水平；和(i)筛选所述人源化抗体文库，以测定与所述模板抗体对抗原的亲和性相比的所述人源化抗体对相同抗原的亲和性。