EST-SSR标记鉴定中药溪黄草品种的方法和引物

摘要

本发明涉及利用EST-SSR标记鉴定中药溪黄草的品种的方法，包括以下步骤：(1)提取待测样品基因组的DNA；(2)以步骤(1)提取的DNA为模版，用基于溪黄草转录组序列的EST-SSR核心引物组进行PCR扩增；(3)对扩增产物进行测序分型；所述EST-SSR核心引物组包括24对引物中的至少10对，每对引物由上游引物和下游引物组成，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.48。该方法能够对常见溪黄草的药材基源品种及混伪品进行有效、快速的鉴定，结果准确、可靠，该鉴定方法简单易行，时效性高，适用于市场及生产上溪黄草药材的种质鉴定及品种保护。

主权项

一种利用EST‑SSR标记鉴定中药溪黄草的品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测样品基因组的DNA；(2)以步骤(1)提取的DNA为模版，用基于溪黄草转录组序列的EST‑SSR核心引物组进行PCR扩增，得到不同长度的扩增产物；所述EST‑SSR核心引物组包括下述24对引物中的至少10对，每对引物由上游引物和下游引物组成，每对引物的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO2、SEQ ID NO.3‑SEQ ID NO4、SEQ ID NO.5‑SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7‑SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9‑SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11‑SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13‑SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15‑SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17‑SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19‑SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.21‑SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23‑SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.25‑SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.27‑SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.29‑SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.31‑SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.33‑SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.35‑SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.37‑SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.39‑SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41‑SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43‑SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45‑SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.47‑SEQ ID NO.48，其中编号为奇数的核苷酸序列为上游引物，编号为偶数的核苷酸序列为下游引物；所述PCR扩增所用的引物还包括一个5’端用荧光标记的通用M13引物，所述通用M13引物的序列为SEQ ID NO.49；(3)对步骤(2)所得不同长度的扩增产物进行测序分型。