| 主权项 |
用于检测怀疑包含至少靶序列的第二等位基因变体的核酸样品中的靶序列的第一等位基因变体的方法，包括：a)通过组合：i)核酸样品；ii)第一等位基因特异性引物，其中所述第一等位基因特异性引物的等位基因特异性核苷酸部分互补于靶序列的第一等位基因变体，并且其中所述第一等位基因特异性引物的熔解温度Tm是50℃‑67℃；iii)第一等位基因特异性封闭探针，其互补于包含第二等位基因变体的靶序列的区域，其中所述区域包含对应于所述第一等位基因特异性引物的等位基因特异性核苷酸部分的结合位置的位置，并且其中所述第一等位基因特异性封闭探针包含不可延伸的封闭部分，其中所述不可延伸的封闭部分包括位于3’末端的、抑制引物延伸反应的MGB部分；iv)第一基因座特异性引物，其互补于在第一等位基因变体的3’并且在相对链上的靶序列的区域；和v)具有两个标记物的第一基因座特异性检测探针；形成第一反应混合物；b)使用第一基因座特异性引物和第一等位基因特异性引物在第一反应混合物中进行扩增反应，以形成第一扩增子；和c)通过检测第一检测探针的可检测性质的变化来检测第一扩增子，从而检测核酸样品中的靶基因的第一等位基因变体，其中第一等位基因变体是稀少或突变体等位基因并且第二等位基因变体是野生型等位基因，并且其中所述方法提供的选择性为检测100,000至1,000,000个或其中任意部分范围的野生型等位基因的背景中的1个第一等位基因变体分子。 |
