一种同时富集磷酸化肽段和糖基化肽段并质谱分析的方法

摘要

本发明属蛋白质分析领域，涉及富集磷酸化肽和糖基化肽的方法,具体涉及一种利用氨基修饰的磁性纳米材料同时选择性富集磷酸化肽和糖基化肽的新方法。本发明通过一锅法合成了氨基修饰的磁性纳米材料Fe₃O₄@NH₂，利用磁性材料Fe₃O₄和磷酸化肽之间的螯合作用以及材料表面带正电的氨基和带负电的磷酸肽之间的静电作用，实现磷酸化肽段的选择性富集；利用磁性纳米材料表面氨基的亲水性实现糖肽的选择性富集；进一步实现磷酸化肽段和糖基化肽段的同时富集和质谱分析。本发明方法步骤简单、操作方便、快速高效，可以实现磷酸化肽和糖基化肽的同时高灵敏质谱分析。

主权项

一种同时富集磷酸化肽段和糖基化肽段并质谱分析的方法，其特征在于，采用氨基修饰的磁性纳米材料为吸附剂，实现磷酸化肽段的选择性富集和糖基化肽的选择性富集后,进行基质辅助激光解吸离子化质谱分析；其包括步骤：(1)在多肽样品中，加入氨基修饰的磁性纳米材料与多肽溶液混合；(2)外加磁场，使磁性材料和溶液分离，分别收集上清液和收集下层固体相；(3)收集下层固体相，清洗材料，清洗后外加磁场将材料和溶液分开，收集材料，用含有5％氨水的水溶液再混匀材料；外加磁场再次将材料从上清液中分离后，取上清液与有机基质混合，进行基质辅助激光解吸离子化质谱分析；(4)在步骤(2)获得的上清液中加入碳酸氢铵溶液，使pH呈中性；再加入氨基修饰的磁性纳米材料与多肽溶液混合使样品中的糖基化肽充分吸附，外加磁场，使磁性材料和溶液分离，收集下层固体相；清洗材料，每次清洗后外加磁场将材料和溶液分开，收集材料；(5)用含有三氟乙酸的水溶液再混匀材料；外加磁场再次将材料从上清液中分离后，取上清液与有机基质混合，进行基质辅助激光解吸离子化质谱分析。