一种具有抗菌活性的水蛭多肽锌螯合物的制备方法

摘要

本发明公开了一种具有抗菌活性的宽体金线蛭源多肽锌螯合物的制备方法，该方法的主要步骤包括：（1）宽体金线蛭组织脱脂（2）宽体金线蛭源蛋白的酶解；（3）宽体金线蛭多肽分离；（4）宽体金线蛭酶解多肽与七水合硫酸锌的螯合反应；（5）螯合反应产物的醇沉分离和洗涤。本发明制得的水蛭多肽锌螯合物具有较高的得率和螯合率，通过牛津杯法抑菌检测试验证明其对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌具有明显的抗菌生物活性，在食品、医药领域具有巨大的应用前景。

主权项

一种具有抗菌活性的水蛭多肽锌螯合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）宽体金线蛭组织脱脂：将宽体金线蛭冻死后匀浆，匀浆液中加入脱脂剂，在常温下脱脂12~24h，脱脂液离心，将沉淀冷冻干燥得到脱脂产物；2）宽体金线蛭源蛋白的酶解：将脱脂产物与去离子水按1:10~1:20（w/v）混合，加入复合酶或单一酶进行催化水解反应，反应液离心后保留上清液，冷冻干燥，制得宽体金线蛭多肽冻干粉粗品；3）宽体金线蛭多肽分离纯化：将宽体金线蛭多肽冻干粉粗品溶于去离子水，配制多肽浓度为10mg/ml的样品溶液，将5ml样品上凝胶层析柱分离，用去离子水洗脱，通过层析柱蛋白质分子量标准曲线测算各组分分子量，将分子量小于10KD的组分合并后冷冻干燥，经过多次分离，获得足量分子量小于10KD的多肽冻干粉；4）宽体金线蛭酶解多肽与七水合硫酸锌的螯合反应：将分离后的分子量小于10KD的多肽冻干粉全部溶于去离子水中得到多肽溶液，加入七水合硫酸锌，在恒温磁力搅拌水浴中进行螯合反应；5）螯合反应产物的醇沉分离和洗涤:将步骤4）所得的螯合反应液用体积分数为70%~90%乙醇溶液反复洗涤、离心数次保留沉淀，在离心上清液中加入5~8滴0.2%双硫腙‑氯仿试液，待上清液无颜色反应后，将所得沉淀物冷冻干燥，制得宽体金线蛭多肽锌螯合物。