一种纳米荧光探针测定三聚氰胺的方法

摘要

本发明公开了一种纳米荧光探针测定三聚氰胺的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：（1）金纳米粒子的制备；（2）金纳米粒子探针的制备；（3）金电极的处理；（4）三聚氰胺的测定；（5）荧光强度的测定。利用二茂铁作为信号分子和三聚氰胺与胸腺嘧啶之间的特异性结合，通过荧光染料发生脱离并导致荧光探针的显著激活，实现了对三聚氰胺含量以及荧光度的测定。

主权项

一种纳米荧光探针测定三聚氰胺的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：（1）金纳米粒子的制备：将浓度为0.003‑0.005mol/L硝酸银溶液加热至沸腾后加入植酸钠溶液并持续加热至沸腾，并保持15‑20min后加入浓度为0.003‑0.005mol/L植酸钠溶液，在剧烈搅拌下，加热至沸后，快速加入质量浓度为1.5‑1.8%新配制的柠檬酸三钠溶液，连续煮沸，待溶液颜色由深蓝变为红色，即可得到红色的金纳米粒子（Au）溶液，冷却至室温后稀释到100 mL，摇匀，置于4 °C冰箱中保存；（2）金纳米粒子探针的制备：将5mg二茂铁羧酸加入到10 mL 0.1 mol/L的磷酸缓冲溶液溶液中，再加入含有3‑5%罗丹明B 异硫氰酸酯的荧光染料，将此混合溶液在室温下剧烈搅拌反应2 h，离心分离去除过量的荧光染料，用牛血清白蛋白将金纳米颗粒表面的活性位点进行封闭半小时，获得可激活金纳米荧光探针，4℃保存备用；（3）金电极的处理：首先将金电极在麂皮上分别用氧化铝粉抛光，依次用乙醇和蒸馏水分别超声8min，最后在0.1 mol/L H₂SO₄溶液中进行循环伏安扫描直至电流电压曲线稳定；在洁净的金电极表面滴加2 μM DNA1，在25 °C下组装120 min，修饰了DNA1的金电极表面经充分洗净后，用高纯氮气吹干，然后将金电极浸入1 mM 巯基己醇中，25 °C下封闭50 min；（4）三聚氰胺的测定：将10.0 μL不同浓度的三聚氰胺标准溶液或样品溶液和10.0 μL Au‑Fc‑DNA2复合物溶液滴加到修饰了DNA1的金电极表面，在室温下反应60 min，然后，用磷酸缓冲溶液反复冲洗电极表面，除去未结合的三聚氰胺和Au‑Fc‑DNA2复合物，利用差分脉冲伏安法（DPV）在磷酸缓冲溶液中以100 mV/s的扫速进行扫描，电位扫描范围为‑0.7~0.1 V，根据电化学信号对三聚氰胺进行定量，（5）荧光强度的测定：将标准抗原（1pg/mL 到100ng/mL）及待测样本溶液中加入到96 孔板孔中，并在37℃下温育1 小时，将处理后的金电极加入到到96 孔板孔中，加入适量半胱胺（1mM），避光震摇1 分钟后测试荧光强度。