食品致病性细菌检测试剂盒

摘要

本发明涉及食品检测用品领域内的一种食品致病性细菌检测试剂盒，主要由引物组合和膜芯片组成，其特征在于引物组合为10重聚合酶链式反应引物组合，其中，反向引物的5’端接上Tag序列，引物组合中还含有一条5’端带生物素标志的Tag引物，膜芯片为顺序固定在支持膜表面的10组探针序列、1组阳性对照探针序列和1组阴性对照探针序列。本发明克服了现有食品检测技术费时、费力、成本高、单次反应检测指标少的缺陷，提供的食品致病性细菌检测试剂盒操作简单，快速灵敏，检测通量大，检测结果可视化，成本低廉。

主权项

一种食品致病性细菌检测试剂盒，主要由引物组合和膜芯片组成，其特征在于引物组合为10重聚合酶链式反应引物组合，各对引物的碱基序列5’‑3’如下：细菌通用内参基因：正向引物：TGCGGTTGGATCACCTCCT反向引物：TCCCCACCTTCCAGTT；大肠杆菌O157：正向引物：TCAGAGTTTACCGCAACCTATCCA反向引物：GCCAACGAGCTTCAATGTATTCCA；志贺氏菌：正向引物：GTGGAGAGGCGTAATACAATACCC反向引物：TAATCCATGCCGCAAACACC；金黄色葡萄球菌：正向引物：TCGCTAAGTATGTTTATGCCTT反向引物：TTGGGATAAATGATAGCCATCG；空肠弯曲杆菌：正向引物：TCTTGAAAAGCGTTTTAATGTGA反向引物：TAACTCGCTTCTTCATATAGTGG；单核细胞增生李斯特菌：正向引物：TATAGCATTATATCAAACCGGAAG反向引物：AACTTGGCTCTACTATTCTCA；沙门氏菌：正向引物：ATTAACAGCATCCCGACGGAG反向引物：GGTATTCCGCATACGCTGCAAC；阪崎肠杆菌：正向引物：TCGTTCGCATATTTAAAGGGGAT反向引物：TTTTACCAGCGTCTGAAAACTGTC；霍乱弧菌O1群及O139群：正向引物：CAATATTTAGCCGTCAATAAACCC反向引物：AATTGACCACCAAGTATTACCTGA；副溶血性弧菌：正向引物：GGTAAAATGGCGTTAATTCCC反向引物：CCACATAGTAATTAAGTCACGTC；其中，反向引物的5’端接上Tag序列，该Tag序列为5’‑AGTCCATGTCCCGAAACGTATACCGCAGTATGGCT‑3’，引物组合中还含有一条5’端带生物素标志（biotin）的Tag引物，其碱基顺序如下所示：Tag引物：biotin‑5’‑AGTCCATGTCCCGAAACGTATACCGCAGTATGGCT‑3’；膜芯片为顺序固定在支持膜表面的10组探针序列、1组阳性对照探针序列和1组阴性对照探针序列，10组探针序列、阳性对照探针序列及阴性对照探针序列的碱基序列5’‑3’如下：细菌通用内参基因探针: CGGTCGTGTAGGTTCGCCAGCCACTTA；大肠杆菌O157探针: CAAGCCTGCCGTCATCCGAAC；志贺氏菌探针: CAGTTGACACCCGACCAACCAG；金黄色葡萄球菌探针: CAATTGCCTGATGTCGTGGT；空肠弯曲杆菌探针: TTGAGTTTGAACGAAAGCTCGAA；单核细胞增生李斯特菌探针: AATTCCAATCATCGTGCCACC；沙门氏菌探针: ACGATAAACACCCAGCCGAGCA；阪崎肠杆菌探针: CCCTGAACAAGGCGCTCGTG；霍乱弧菌O1群及O139群探针:AATCACCAAAACCTTCACGAGCA；副溶血性弧菌探针: AATAGCTTGATTAAGGCTCGGAT；Positive探针: GCATCCAGATCAGAAGCAATAATGAGCAGTGCGAGAAGAACGAGTGTCCAAAGTACCAG；Negative探针：GGTTCCTTGAGAAATGTTTTACGGGATTACTTCCATGTTTGTTGGATGATCCTATTTTC。