一种生物转化三七总皂苷制备人参皂苷Rd的方法

摘要

本发明公开了一种生物转化三七总皂苷制备人参皂苷Rd的方法，本方法采用锥毛壳属植物内生菌Coniochaetasp.EA-9或其分泌粗酶液对三七总皂苷进行生物转化，制得人参皂苷Rd和C-K；本发明方法操作简单、转化特异性强、反应条件温和，微生物次级代谢产物少，提取发酵产物简单；转化率高，可用于人参皂苷Rd的大量制备，实现人参皂苷Rd的产业化。

主权项

一种微生物转化三七总皂苷制备人参皂苷Rd的方法，其特征在于按如下步骤进行：  （1）采用常规PDB培养基或马丁氏培养基活化培养锥毛壳属植物内生菌Coniochaetasp. EA‑9；  （2）将步骤（1）活化后菌种接种到无菌PDB培养基进行扩大培养，接种量为质量百分比0.02%～10%，摇床培养2～5 d；  （3）按三七总皂苷与乙醇溶液的质量比为1：4～1：10的比例，用体积百分比浓度为70%～75%的乙醇溶液溶解三七总皂苷，浸泡10～30min后，在无菌条件下将三七总皂苷溶液倒入步骤（2）培养结束后的菌液中，继续摇床培养6～12 d，其中三七总皂苷的添加量为菌液质量的0.02%～1%；  （4）发酵培养结束后，采用超声法破碎菌丝团，超声时间10～30 min，然后减压抽滤分离发酵液与菌丝体，发酵液用水饱和正丁醇等体积萃取3～4次，合并上层正丁醇相，减压蒸发浓缩，即得富含人参皂苷Rd的转化后三七总皂苷；    所述锥毛壳属植物内生菌Coniochaetasp. EA‑9在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC NO. 11392。