四种菌的三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法

摘要

本发明公开了一种猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌及鸡伤寒沙门氏菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法。本发明利用三重实时荧光PCR方法，将猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌共有序列用于检测猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌，伤寒沙门氏菌的特异序列用于检测伤寒沙门氏菌，鸡伤寒沙门氏菌的特异序列用于检测鸡伤寒沙门氏菌，通过一次实时荧光PCR扩增来判断样品中是否受到猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌及鸡伤寒沙门氏菌的污染，再通过单一荧光PCR扩增区分猪霍乱沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌，检测快速，可在31h完成从制备样品到出具检测结果的过程，结果可靠，且灵敏度高、特异性强。

主权项

一种猪霍乱沙门氏菌、丙型副伤寒沙门氏菌、伤寒沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌的三重实时荧光PCR检测试剂盒，包括实时荧光PCR反应液、UNG酶、耐热DNA聚合酶、检测引物和检测探针，其特征在于，所述的检测引物包括四对：(1)针对猪霍乱沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌的共有序列：SCF：5`‑GATAGGGCTGGTGTTGAAGAG‑3`；SCR：5`‑GGTGCAGATAACTCCAACAGG‑3`；(2)伤寒沙门氏菌特异序列：STF：5`‑GTGGCTATGCAGTGAAAATGG‑3`；STR：5`‑CACCAAATTTCACAGCTCCAG‑3`；(3)鸡伤寒沙门氏菌特异序列：SGF：5`‑CGATATAGCTTACTGTGTCCCG‑3`；SGR：5`‑TCATGCACTACCACCATAACG‑3`；(4)猪霍乱沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌的差异序列：SPF：5`‑AGTTGAAGCTGAACAGTCGC‑3`；SPR：5`‑TCGCCAACAGAGACTTTGATC‑3`；所述的检测探针包括：(1)猪霍乱沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌的共有序列的探针：SCP：5`‑AGCACGCTGGTTAGGTGGAATAACTC`；(2)伤寒沙门氏菌特异序列的探针：STP：5`‑ACAGATGGTACTGGCGTTGCTCAAA‑3`；(3)鸡伤寒沙门氏菌特异序列的探针：SGP：5`‑ACATCCCTCATATCGGCGCGAAC‑3`；(4)猪霍乱沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌的差异序列的探针：SPP：5`‑AGCCTCTATGGAAGTTCCGTCTCCT‑3`；探针的5`端标记有荧光报告基团，3`端标记有荧光淬灭基团，猪霍乱沙门氏菌和丙型副伤寒沙门氏菌的共有序列的探针、伤寒沙门氏菌特异序列的探针和鸡伤寒沙门氏菌特异序列的探针的5`端标记的荧光报告基团是不同的荧光报告基团。