一种使用水葫芦作为发酵原料制备丁二酸的方法

摘要

一种使用水葫芦作为发酵原料制备丁二酸的方法，如下：（1）水葫芦的预处理：（2）一级培养，将菌种放入种子培养液中进行培养，培养时间为14h；（3）二级培养，一级培养后接种子培养基，接种量为4%，培养时间达到7h后得培养液；（4）三级培养，将培养液接入发酵培养基，在发酵罐中二氧化碳的通入量为0.5~5L/min，发酵过程中流加摩尔浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液维持发酵系统的pH值在5.5~6.5之间，温度为37~39℃，发酵时间为48h，发酵结束时钠离子浓度达到1.5%~2%，发酵结束后得丁二酸。生产成本低廉的同时，做到了降低对环境的污染的要求。

主权项

一种使用水葫芦作为发酵原料制备丁二酸的方法，其制备方法如下：本发明水葫芦的预处理：先将水葫芦原料进行离心甩干，得干燥的水葫芦；将水葫芦用摩尔浓度为2%—3%的氢氧化钠水溶液在120度条件下浸泡2小时，水葫芦与氢氧化钠水溶液的质量比为1: 10；②浸泡结束后，将固体滤出，使用去离子水清洗，冲洗至中性，加入柠檬酸或其他有机酸调整溶液pH至4.0~4.5，温度调整到38~40度，此时溶液的固液比为1:10，按质量比计；③将诺维信纤维素酶Carezyme®4500L加入到经步骤（1）②处理的溶液中进行水解，时间为48小时，诺维信纤维素酶Carezyme®4500L的投加量为水葫芦固体物中纤维素与半纤维素含量的10%，质量为2.6g；将溶液中固体滤除，并收集滤出液，此滤出液为纤维素酶水解液；⑤将纤维素酶水解液进行浓缩，浓缩至总糖含量达到350g/L，得水解糖液；（2）配置发酵培养基采用去离子水配制发酵培养基100mL，发酵培养基的组成成分按质量浓度计为：蛋白胨5g/L，玉米浆10g/L，总还原糖含量100g/L，磷酸二氢钾 2.5g/L，磷酸氢二钠2.5g/L，酵母膏5g/L，乙酸钠1 g/L，用去离子水配制，其中总还原糖取自所述水解糖液；（3）一级培养将琥珀酸放线杆菌（Actinobacillus succinogenes）CGMCC 1593放入种子培养液中进行培养，培养时间为14h；（4）二级培养一级培养后接种子培养基，接种量为4%，培养时间达到7h后得培养液；（5）三级培养将培养液接入发酵培养基，在发酵罐中二氧化碳的通入量为3L/min，发酵过程中流加摩尔浓度为1mol/L的氢氧化钠溶液维持发酵系统的pH值在5.5~6.5之间，温度为37~39℃，发酵时间为48h，发酵结束时钠离子浓度达到1.5%~2%，发酵结束后得丁二酸。