一种J亚群禽白血病免疫胶体金抗体检测试纸条

摘要

本发明提供了一种J亚群禽白血病免疫胶体金抗体检测试纸条，其中最主要的是采用了原核表达后纯化的J亚群禽白血病病毒表面蛋白偶联免疫胶体金，利用该胶体金可以快速检测血清中的J亚群禽白血病抗体，进而为鸡群J亚群禽白血病精准快速诊断提供技术保障。通过Western Blot检测表达的gp85蛋白能够与JE9单抗和抗HIS标签抗体发生特异性反应，表明具有良好的特异性。

主权项

一种J亚群禽白血病免疫胶体金抗体检测试纸条，其特征在于：采用了原核表达后纯化的J亚群禽白血病病毒表面蛋白偶联免疫胶体金，其中所述的原核表达后纯化的J亚群禽白血病病毒表面蛋白为带有HIS标签的融合蛋白His‑gp85，所述试纸条，包括支撑层和吸附层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从测试端依次为样品吸附纤维层、金标SU蛋白纤维层、纤维素膜层及吸水材料层；在所述的纤维素膜层中部有一条包被J亚群禽白血病SU蛋白的检测线和一条包被SU蛋白兔多克隆抗体的质控线，所述的纤维素膜层一端嵌入金标SU蛋白纤维层，另一端嵌入吸水材料层中；所述试纸条的制备方法如下：根据现有的ALV‑J设计特异性引物，所述的正向引物为5’‑GCGGATCCATCAAGAACGGAACAACACG‑3’，含BamHⅠ酶切位点，其基因序列如SEQ ID NO.2所示；反向引物为5’‑GCGCGCAAGCTTGTCCCCACAAATCAAGAAAATA‑3’,含Hind III酶切位点，其基因序列如SEQ ID NO.3所示；利用上述一对引物以NX0101的DNA为模版进行PCR扩增：PCR反应条件为：95℃5min，充分变性后进入循环体系：95℃40s，65℃1min，72℃1min，循环35次后72℃延伸10min；扩增产物测序，其基因序列如SEQ ID NO.1所示；利用该基因片段连接pET30a载体，得到了重组载体pET30a—gp85重组质粒，使用1mmoL IPTG诱导表达得到带有HIS标签的融合蛋白His‑gp85，进而利用该蛋白与胶体金偶联后涂布于玻璃纤维素膜中，制成试纸条。