异香豆素类抗生素和田霉素(Hetiamacin)B、C、D及其制备和应用

摘要

本发明提供三个异香豆素类新抗生素和田霉素（Hetiamacin）B、C、D及其制备方法以及和田霉素B、C、D及其组合物在制备抗生素药物中的应用。上述化合物左侧都具有所有Amicoumacin类化合物的骨架结构：甲基丁基氨基-3,4-二氢-8-羟基异香豆素；右侧侧链上10′-C、11′-C、12′-C、14′-C与13′-NH、15′-NH相连，形成一个六氢嘧啶环结构。上述化合物通过对枯草芽孢杆菌菌株的发酵并分离而得，对革兰氏阳性细菌如葡萄球菌属及其耐药菌等具有很高的抑制活性，有望成为抗革兰氏阳性菌药物及其先导化合物而具有良好的药用开发前景。

主权项

和田霉素B、C、D的制备方法，所述和田霉素B、C、D的结构如式(1)、(2)、(3)所示：(1)和田霉素B(2)和田霉素C(3)和田霉素D其特征在于，制备方法包括如下步骤：首先发酵培养保藏编号为CGMCC No.6688的枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subtilis subsp.inaquosorum)PJS；然后从发酵物中提取、分离所述的和田霉素B、C、D；所述发酵培养步骤为：将保藏编号为CGMCC No.6688的枯草芽孢杆菌菌株(Bacillus subtilis subsp.inaquosorum)PJS接种于种子培养基上培养，然后转入发酵培养基培养，培养成熟后收获发酵液；所述提取、分离步骤包括：发酵液经离心、布氏漏斗抽滤后，以3‑4BV/h的速度通过HP‑20型大孔树脂，流出液弃去；用1‑2BV体积的蒸馏水洗涤树脂层，再分别用2‑3BV的30％、50％、80％丙酮‑水溶液洗脱树脂，除去洗脱液中丙酮，获得的水溶液经冷冻干燥后分别获得30％丙酮‑水溶液、50％丙酮‑水溶液、80％丙酮‑水溶液洗脱出的粉末状粗品；而后50％丙酮‑水溶液洗脱的粉末状粗品用甲醇溶解，湿法上样于RP‑C18中压柱，用甲醇‑水进行分级梯度洗脱，即30％甲醇‑水溶液150mL，60％甲醇‑水溶液200mL，90％甲醇‑水溶液200mL，按5‑6mL/管收集洗脱液；60％甲醇‑水洗脱液进行LC‑MS的检测，含相同成分的管合并后减压浓缩，得到分别含有不同目标化合物的半纯品，其中所述目标化合物的MW＝449或463；半纯品溶于甲醇，用HPLC进行制备，以48％甲醇‑水溶液，2mL/min的流速进行等度洗脱，分别收集254nm紫外波长下出现在29min、26min、33min附近的色谱峰，除去甲醇的水溶液经冷冻干燥，得到白色或浅黄色粉末状的成品化合物即和田霉素B、C、D。